猪繁殖与呼吸综合症又称“猪蓝耳病”是由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)所引起的猪繁殖障碍和呼吸疾病为主要特征的一种传染性疾病。该病于1987年首次在美国发现,此后在世界许多国家都有该病例的报道,我国于1996年由郭宝清等在流产胎儿中分离到PRRSV。近年来,全国许多省份都有该病流行的报道,是我国危害严重的疾病之一,给养猪业带来重大经济损失。下面一起来了解一下:猪繁殖与呼吸综合症的病因、流行病学及防治措施。
1、病原
该病毒属于动脉炎病毒科,动脉炎病毒属。1991年在荷兰兽医研究中心,从感染的病猪分离得到,并命名Lelystad病毒(LV)。病毒粒子呈卵圆形,有囊膜,直径50~65 nm,为单股正链RNA病毒。其分为两个毒株型,即欧洲型和美洲型,两者在抗原性上有一定的差异。
2、流行病学
目前,猪是唯一感染PRRSV的动物,其主要侵害繁殖母猪和仔猪,而育肥猪发病较温和。该病可以通过空气、直接接触、精液及粪便等多种途径传播,还可以通过胎盘感染胎儿,使胎儿致病。另外,猪场卫生条件差,饲养密度大,也是该病流行的不利因素。
3、诊断方法
在生产实践中可以根据妊娠母猪后期发生流产、死胎、木乃伊胎,新生仔猪死亡率高,发病仔猪出现间质性肺炎的特征性病变及临床症状,可以初步诊断为PRRS。但该病的确诊还有赖于实验室诊断,其方法分为血清学诊断和病原学诊断。
3.1 血清学诊断
血清学试验操作容易,敏感性和特异性都较高,因此广泛应用于实验室的诊断方法。目前国内外已建立四种检测PRRSV抗体的方法:免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)、间接免疫荧光试验(IFA)、血清中和试验(SN)和间接酶联免疫吸附试验( ELISA)。
3.1.1 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)
IPMA由Wensvoort等在1991年率先建立,是当时最早用于PRRSV的血清学诊断方法,至今仍是常用的检测手段。其具有较高的敏感性和特异性,能从感染后6天的猪体中检测出PRRSV抗体。但由于该方法检测的结果有一定主观性,须肉眼判断,所以不适于大规模检测。
3.1.2 间接免疫荧光试验(IFA)
IFA敏感性和特异性均较好,在美国被广泛应用,该法需细胞培养、荧光镜检,结果依肉眼观察,具有一定局限性。
3.1.3 血清中和试验(SN)
SN特异性好,但由于中和抗体出现时间较晚,不适用于早期诊断。Yoon等人为添加20%新鲜猪血清或小鼠血清增加补体含量,提高试验的敏感性,可在PRRSV感染的早期作出诊断。
3.1.4 酶联免疫吸附试验( ELISA)
ELISA主要用于PRRSV抗体检测,具有良好特异性和敏感性。Dea[5]等建立的竞争性酶联免疫吸附试验,对人工感染的猪检测结果表明,其特异性和敏感性分别达到100%和96%。
3.2 病原学诊断
病原学诊断与其他的诊断方法相比,除了对疾病的准确诊断外,还可以鉴定毒株类型,并对病毒基因序列的分析提供了方法依据。另外,随着分子生物学的研究不断深入,病原学诊断也越来越得到广泛应用,其中包括病毒分离与鉴定和分子生物学诊断。
3.2.1病毒分离与鉴定
取病猪的肺脏、血清或淋巴结,将其病料接种原代肺泡巨噬细胞(PAM)或传代细胞系CL- 2621、MarC - 145进行培养,经传代后出现特征CPE者,表明病毒分离呈阳性。也可将细胞培养分离的病毒,用间接荧光技术和酶抗体法进行鉴定。
3.2.2分子生物学诊断
分子生物学技术已成为现代医学不可缺少的一种疾病的诊断方法。尤其是RT- PCR技术、核酸探针原位杂交技术等诊断方法。
3.2.2.1 RT- PCR技术
将提取PRRVS的RNA转录成cDNA作为模板,再对其不同的ORF基因序列设计相应的引物,然后对引物进行扩增,检测目的基因,由此建立了RT- PCR技术的诊断方法。这种诊断技术不仅特异性强、效率高,而且能够鉴定毒株类型。Christoph等建立的TaqMan RRT - PCR的方法,对美洲毒株和欧洲毒株感染的群猪进行准确鉴别。另外,PRRSV的ORF7基因序列保守性较好,因此用RT -PCR法来诊断PRRS,常以检测ORF7基因序列作为诊断依据。
3.2.2.2 核酸探针原位杂交技术(ISH)
ISH是采用地高辛标记ORF7基因的cDNA制备特异性探针,来检测组织切片中的病毒RNA。Sur等以PRRSV的RNA为模板,通过RT- PCR扩增ORF7基因片段,利用地高辛标记方法制备PRRSV特异性cDNA探针,建立了检测PRRSV RNA的原位杂交技术。该方法具有较高的敏感性和特异性,可以在淋巴结、肺泡巨噬细胞等组织感染细胞内检测到PRRSV的RNA。
4、防治措施
该病目前尚无特效药物疗法,主要采取综合的防治措施,其防治的关键是如何做好PRRVS的防疫工作。因此,主要实施细节包括加强饲养管理,经常消毒畜舍、定期免疫及检测等防治措施。另外,严禁从疫区引进种猪,引进之前必须进行PRRS检测。
4.1 加强饲养管理
坚持自繁自养,全进全出的原则。保持良好的卫生环境,及时清除舍内粪便,对各种污染物进行无害化处理,按季节合理安排猪群密度,做好防虫灭鼠工作,防止与禽类接触。对外来人员出入猪场要进行严格控制,工作人员及车辆的出入应进行消毒处理。
4.2 经常消毒畜舍
由于该病可以通过空气、直接接触、粪便等多种途径传播,所以对畜舍的消毒也是切断这些传播途径的重要手段。一般对非疫区每2周全场大消毒1次,每周1~2次带猪消毒。消毒剂使用复合醛类对猪场、舍内进行消毒,而散养户的猪栏圈舍可使用生石灰进行消毒。
4.3 定期免疫及检测
在疫苗的选择上,虽然弱毒苗与灭活苗相比免疫性较好,但在安全性上存在着潜在的问题,所以在生产实践中要谨慎使用。另外,PRRSV有抗体依赖性增强的现象(ADE),因此要定期检测血清的抗体,以防止抗体低于保护水平,增加发病几率。
对无PRRS病史的猪场,一般选用灭活疫苗,在母猪配种前1个月和产前1个月各接种1次,种公猪每4个月接种1次,并定期检测抗体水平。而对发生PRRS的猪场,根据具体情况可以选择弱毒疫苗。在后备母猪配种前2~3周进行1次加强免疫,有效抵抗怀孕期PRRSV的侵害;新生仔猪可采用二次免疫法,即断奶前后各免疫1次。
5、结语
猪繁殖与呼吸综合症自1987年在美国被发现以来,至今已经传遍世界各地,其危害性所造成的经济损失是不容忽视的。由于该病目前尚无特效药物治疗,因此,做好PRRS的防治工作是降低PRRS发病率的重点。虽然该病疫苗的临床应用已经得到普及,但PRRSV变异毒株的不断出现也给防疫工作带来了巨大挑战。笔者相信,随着科学技术的向前发展,人们终会发现流行病毒的变异规律,解决流行疾病暴发带来的灾难。
繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起猪的一种传染病。主要特征是母猪呈现发热,流产,产木乃伊胎、死胎、弱胎等症状;仔猪表现出异常呼吸困难症状和高死亡率。现将该病的诊断及防治经验介绍如下。
1 发病情况
2006年8月至2008年底,我县畜牧管理站门诊部临床共诊疗(包括尸体剖检)猪病857例,其中养猪场63例,散养户794例。据统汁:发病率通常以母猪、仔猪较高,肥育猪较少;死亡率以仔猪最高,其次为母猪和育肥猪;90%以上的妊娠母猪发生流产、早产、产死胎和弱胎并继发不孕。
2 猪繁殖与呼吸综合症临床症状
(1)妊娠母猪初期精神倦怠,厌食,体温升高至41~42℃,皮肤潮红,呼吸急促,眼结膜发红,鼻镜干燥等症状。病程较长的母猪后期四肢瘫痪,呼吸困难,呈腹式呼吸,全身发绀,而后衰竭死亡。妊娠后期流产、早产和死胎,产出弱仔数明显增多,产后无乳,6周后出现重新发情的现象,但造成母猪不育,少数猪耳部发紫,皮下出现一过性血斑。(2)仔猪以2~28日龄感染后症状明显,早产仔猪在出生当时或几天内死亡。大多数出生仔猪表现被毛粗乱,精神沉郁,体温高达42℃,呼吸困难,肌肉震颤,四肢麻痹,共济失调,有的仔猪耳发紫和躯体末端皮肤发绀,便秘。育成猪双眼肿胀,结膜炎和腹泻,出现肺炎症状。
3 病理变化
主要病变出现在呼吸系统和淋巴组织。肺脏呈红褐色花斑状,不塌陷。显微镜病变主要表现为间质性弥漫性肺炎,肺泡壁增厚,肺间质增宽,肺泡及肺泡膈水肿和炎性细胞浸润。在感染病毒后48、60、72小时剖检猪,腹膜、肾周围脂肪、肠系膜淋巴结、皮下脂肪和肌肉发生水肿,子宫颈淋巴结、胸腔前上侧淋巴结和腹股沟淋巴结中度到重度水肿,并呈褐色。部分肺与胸膜粘连。心包炎,心包积液,心壁变薄。部分病死猪肝脏肿大,表面有少量出血点或坏死斑点,有的黄染,质地较脆。脾脏肿大、坏死,边缘呈锯齿状。肾脏肿大,表面有白色斑点。剖检大化县某养猪场一经产母猪发现,胸腔有大量黄色或黄褐色水样分泌物渗出,腹膜炎,腹膜与肠粘连,腹腔有大量黄色腹水,卵巢炎,子宫钙化,输卵管炎。
4 猪繁殖与呼吸综合症诊断
根据荷兰提出的简易诊断方法:20%以上的胎儿死产,80%以上母猪流产,断奶前有26%以上的仔猪死亡,三项中有两项符合即可得出初步诊断。或另一指标作初步诊断:发病14天内死亡数在20%,仔猪出生后第1周发病死亡率大于25%,母猪流产或早产率大于8%。另根据急性病猪在临床显现期和濒死期出现五大病理变化作为初诊依据:(1)急性败血症;(2)全身性的巨噬细胞和血管内皮细胞肿大、活化或增生;(3)间质性肺炎;(4)广泛性的微循环障碍;(5)非化脓性脑炎。确诊需进行实验室诊断。
4.1 病毒分离与鉴定 病毒分离是诊断猪繁殖与呼吸综合症最确切的一种方法,一般采用易感细胞分离法。目前用于分离猪繁殖与呼吸综合症病毒的细胞主要有猪原代肺泡巨噬细胞(PAM)、CL~2621细胞、MA104细胞系的克隆株Marc~145。采集病猪的血清和肺组织分离成功率最高。将猪的肺、死胎儿的肠和腹水、胎儿的血清、母猪血液、鼻拭子和粪便等进行病毒分离。病料经处理后,再经0.45nm滤膜过滤,取滤液接种猪肺泡巨噬细胞培养,培养5天后,用免疫过氧化物酶法染色,检查肺泡巨噬细胞中猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原。
4.2 间接酶联免疫吸附试验(ELISA) 用ELISA可检测猪繁殖与呼吸综合症病毒抗体,方法是用猪繁殖与呼吸综合症病毒接种PAM培养作已知阳性抗原,并用相同方法制备模拟抗原,当阳性抗原孔的OD值与模拟抗原孔的OD值之比大于1.5时,即可判样品为阳性。
4.3 间接荧光抗体试验(IFA) 检测猪繁殖与呼吸综合症病毒抗原,血清抗体滴度≥1∶20时判为阳性,血清抗体滴度≥1∶64作为猪繁殖与呼吸综合症病毒活动性感染标志。
5 猪繁殖与呼吸综合症防治措施
5.1 预防措施 最根本的方法是清除病猪、带毒猪和彻底消毒,切断传播途径。这项工作应反复进行。
5.1.1 建立健康猪群 坚持自繁自养,不从有猪繁殖与呼吸综合症病史的猪场引进猪只,减少健康猪同病毒接触。因生产需要从外引种时,须先对预购猪场进行流行病学调查。引进猪后应隔离观察1个月,同时进行严格检疫,确认无猪繁殖与呼吸综合症方可混群,杜绝带毒猪引入易感猪群。在此基础上再配合严格的日常消毒措施,以建立健康猪群。
5.1.2 坚持全进全出制度,严格管理 早期断奶,不同日龄的仔猪分别饲养在不同场区。肥育猪应实行 全进全出 ,每批猪进出前后猪舍都要进行清洗消毒。严格控制啮卤类动物在猪舍进出、繁殖,防止猪与野生动物、禽类接触。加强饲养管理和搞好卫生防疫工作,合理安排猪群密度。原种猪场和规模化猪场在未查清病因前不能使用疫苗,以免干扰诊断和检疫。搞好检疫,及时淘汰凼‘清学阳性猪,是减少或杜绝该病流行的根本途径。哺乳猪舍的净化是防止本病在哺乳猪群中传播的一项有效措施,可将所有断奶仔猪移至其他猪舍育肥后出售。空圈后彻底清洁3次,然后用甲醛制剂、过氧乙酸等彻底消毒,14天后再进猪饲养。
5.1.3 加强日常消毒 种猪场或规模化猪场应严格执行综合防治措施及消毒制度,防止来访人员随意入场,必须入场人员应消毒洗手、更衣换鞋,车辆用具均应消毒。清除猪舍内外废弃物,用10g/L次氯酸钠彻底消毒1次。然后每周定期带猪消毒2次。种猪、仔猪、育成猪转群时消毒1次。配种区、妊娠区、运动场、育肥舍每周定期带猪消毒1次,周围环境每月定期用50g/L次氯酸钠彻底消毒1次。空闲猪舍用过氧乙酸熏蒸消毒。
5.1.4 免疫接种 本病具有传播途径广、传播速度快、在猪群中长期持续感染等多种特点,使用疫苗是目前有效可行的控制办法,国内外已研制了多种灭活疫苗、弱毒疫苗。对无病的猪场及养猪户,在母猪配种前1个月和产前1个月各接种1次猪繁殖与呼吸综合症灭活苗,配种前1个月接种疫苗是防止胎盘感染,配种后1个月接种疫苗是使仔猪产生母源抗体,种公猪每4个月接种1次,每年3次。对发病猪场及养猪户,在母猪配种前1个月和产前1个月各接种1次猪繁殖与呼吸综合症弱毒疫苗,其产仔猪断奶后1天和1个月各接种1次猪繁殖与呼吸综合症弱毒疫苗;种公猪每4个月接种1次弱毒疫苗,每年接种3次。发病猪场及养猪户使用弱毒疫苗比使用灭活苗好,但弱毒苗不安全,在一般情况下不用弱毒苗,控制不了疫情时才用弱毒苗。
5.1.5 隔离淘汰病猪和消毒猪舍 发病猪场应采取紧急封锁、隔离并注意保持猪舍的通风、干燥。无治疗价值的病猪及病死猪做无害化处理。用具用0.5%过氧乙酸和4%甲醛溶液消毒,全场猪舍用火焰喷射消毒,均为每天2次,连用3天。病死猪的垫草及粪便等污物堆积焚烧。
5.1.6 定期驱虫 体内外寄生虫消耗猪体营养,使猪群抵抗力下降,特别是蛔虫幼虫经肺移行和肺丝虫还会加重呼吸道症状,所以配合药物驱虫对控制本病发展有一定意义,应在断奶仔猪转入保育舍2周后,选择对体内外寄生虫效果明显的驱虫剂进行驱虫。
5.2 药物治疗 治疗本病要标本兼治:退热、抗菌、净化病毒、病后机体的恢复。两年多来,笔者对猪繁殖与呼吸综合症使用了几种不同的临床治疗方案,取得了较好的治疗效果。
治疗方案一:头孢畜健(注射用头孢噻呋钠,齐鲁动物保健有限公司)每250kg体重的猪用1g(1瓶),疫安欣(复方细胞转移因子,德国默克·金制药公司比利时生化分厂)每250kg体重的猪用50mg(1瓶),链血清(广西北斗星)每 100kg体重的猪用10ml(1支),混合肌肉注射;胆王咖食因(广西北斗星)每100kg体重的猪用10ml(1支)肌肉注射,每天1次,连用3~5天。同时配合中草药治疗:连翘、金银花、黄芩、鱼腥草、龙胆草、石膏、白头翁、大青叶、神曲、麦芽、甘草煎水喂服5~7天,可增强猪的抵抗力,防止继发感染,减少死亡。用此方法在临床上治疗275例,治愈234例,治愈率达85%。
治疗方案二:赛福龙(河北远征)每200kg体重的猪用1g(1瓶),疫百特(85%多聚~反义寡核苷肽)每100kg体重的猪用1g(1瓶),疫毒黄金(1278.70,-1.00,-0.08%)甲(广西北斗星)每100kg体重的猪用10ml(1支),混合肌肉注射;胃动力(美国亚卫)每100kg体重的猪用10ml(1支)肌肉注射,每天1次,连用3~5天。同时加喂氨基酸电解多维有利于机体的迅速康复,能迅速增加维生素和电解质的供给量,连喂3~5天,可重复使用。用此方法在临床上治疗了228例,治愈185例,治愈率达81%。
治疗方案三:阿莫西林钠(北赛孚)每100kg体重的猪用1g(1瓶),培罗欣(植物血凝素,美国雅培制药公司澳大利亚公司)每200kg体重的猪用10mg(1瓶),链血清,混合肌肉注射;无名高热康(河北远征)每100kg体重的猪用10ml(1瓶)肌肉注射,每天1次,连用3~5天。同时配合复方香菇多糖拌料饲喂,连喂3~5天,可重复使用。复方香菇多糖与植物血凝素有明显的增强作用,并能抑制病毒DNA和RNA的复制,增强机体免疫功能,快速诱生干扰素,全面抵抗各种病毒感染。用此方法在临床上治疗了354例,治愈304例,治愈率达86%。
6 小结与体会
由于猪繁殖与呼吸综合症是免疫抑制性疾病,不仅造成猪发病与死亡,还造成免疫抑制,导致猪瘟等其他疾病的免疫失败,所以做好猪繁殖与呼吸综合症的防治,能够有效地防止其他疫病的发生。
目前国内已有正规的批准文号的灭活疫苗,但尚无有效的治疗药物,给该病的防治带来一定的困难。在此情况下,使用抗生素、广谱抗病毒药及中草药、各种营养补充剂、免疫增强剂对症及早治疗有一定的疗效。
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