狐狸传染性肝炎的诊断方法

董清莲 （黑龙江省饶河县动物疫病预防与控制中心 155700）

狐狸传染性肝炎也叫狐狸脑炎，在世界各地区广泛流行。犬和狐狸易感，尤其幼龄狐狸最易感。此病除感染狐狸外，也感染犬等毛皮动物。幼狐的发病率高，成狐较低，多半呈地方流行。该病的病原为腺病毒科哺乳动物腺病毒属，临床上的主要特征为体温升高，腹泻与便秘交替，后肢麻痹和神经症状。

1 流行病学

本病感染所有的毛皮动物，幼狐和幼犬最易感，死亡率高达40%~50%，成年狐发病率2%~3%，发病初期死亡率高，中后期死亡率低。发病和带毒的狐为传染源，康复和隐性感染狐为最危险者。病狐通过分泌物和排泄物，污染饲料、饮水、用具及周围环境等途径，传播此病，感染健康狐。狐狸体外寄生虫也能成为本病的传染媒介。该病无明显的季节性，但在夏、秋两季多发。如果饲养密集也是发生此病的重要而不可忽视的条件。

2 临床症状

本病自然感染的潜伏期10~20天以上。人工感染的潜伏期为5~6天。在临床上该病分为3种类型。①急性型。初期精神发呆，食欲不振或废绝。体温高达41.5℃以上，口渴，呕吐，病程3~4天，最后昏迷而死。②亚急性型。精神沉郁，体温出现弛张热，可视黏膜贫血苍白或黄染。一侧或两侧眼发生角膜炎。喜卧，站立不稳，走路摇摆，后肢虚弱无力，甚至麻痹。因发烧心跳加快，每分钟达100~120次，脉搏软弱无力。病狐出现神经症状，兴奋与沉郁交替。个别狐肌肉痉挛，兴奋沉郁，病程长达1个月，最终死亡或转为慢性。③慢性型。病狐症状不明显，时常不爱吃食或无食欲。有时出现胃肠障碍，腹泻和便秘交替，渐进性的消瘦。体温升高是短暂的，如饲养管理不好，会引起死亡。

3 病理学诊断

病理剖检变化。急性病例内脏器官出血，可见胸腔和腹腔的浆膜和胃肠道黏膜出血，偶尔见骨骼肌和膈肌出血点。肝肿大、充血，呈淡红色或淡黄色，切面有粘稠的液体流出。大脑血管充盈。亚急性病例可视黏膜苍白或黄染，骨骼肌为淡红色至淡黄色，在胸前、鼠蹊部和腹部皮下结缔组织胶样浸润和出血。胸腔有少许淡玫瑰色或淡黄色的渗出液。肝为樱桃红色，切面流出血液。肾肿大，被膜下有出血点，切面界线不清。胃肠黏膜潮红、肿胀，为条索状出血。胃内有煤焦油样液体，黏膜上有大小不等的溃疡灶。肠黏膜肥厚，附有粘液。甲状腺肿大2~3倍，出血，周围胶样水肿。心脏为浆液性心包炎，肺有散在性气肿区。慢性病例消瘦和贫血，在肠黏膜皮下组织有新鲜或陈旧的出血点。脂肪营养不良，肝肿大质硬，呈豆蔻状。

病理组织学变化。其特征为血管损坏，（www.nczfj.com）肝呈退行性变化及少量炎性变化。网状-组织细胞系统普遍激活，形成核内包涵体，细胞坏死。

4 病原学诊断

①细胞培养。首先采取病死狐的肝、脑、肾、脾等病料研碎，制成悬液，离心，取上清液接种犬或猪的原代细胞，进行病毒分离培养。根据本病毒特征性的致细胞病变，如出现单个的圆形折光细胞，并在细胞单层内出现空泡，小岛样病变细胞堆积成较大团块，如葡葡样。同时，在细胞核内见有核内包涵体方可确诊。②皮内变态反应。采取病死狐的脏器研碎，制成悬液，离心后取上清液，加入“甲醛”（福尔马林溶液）灭活，然后给狐狸皮内接种，如出现红肿可判为阳性，无红肿可判为阴性。③电子显微镜检查。采取病料研碎，制成悬液，离心，取上清液再离心，弃上清液，在沉淀中加数滴蒸馏水，以吸管吹吸使沉淀分散悬浮，取一滴加于铜网上进行负染。在电子显微镜下可见大小为70~90微米的病毒粒子。

5 血清学诊断

血清中和试验中的固定病毒稀释血清的方法是将事先已滴定的病毒原液稀释成200 TCID50（或LD50、EID50）与等量血清混合后，每个剂量接种量含有100 TCID50。血清先用5倍稀释，放于56℃灭活30分钟，用Hank氏液作倍比稀释。取病毒液与不同稀释度的血清等量混合，在37℃水浴中作用1~2小时，每一稀释度接种3~6瓶细胞培养物，观察细胞病变。另外，应设不加血清的病毒液对照，高浓度血清对细胞的毒性对照，空白对照，阴性、阳性血清对照。结果判定为如果培养的细胞无病变，说明被检病狐血清中有病毒性传染性肝炎抗体，为阳性。如培养的细胞出现病毒，则不是本病，为阴性。在试验对照正确的条件下，计算细胞的半数保护量（PD50），即为中和价。