为了验证不同药物对不同蜱种及发育阶段蜱的杀灭效果是否有差异,本次试验选择了6种药物对亚洲璃眼蜱、血红扇头蜱、长角血蜱三种不同蜱的不同发育阶段进行体外浸渍法处理,通过观察蜱的死亡和产卵情况评价药物的杀蜱效果。结果显示,两种不同厂家生产的氟铃脲和噻虫啉对同种蜱的杀伤作用差别明显;乙基多杀菌素的浓度为160 mg/L时,对亚洲璃眼蜱饱血若蜱的致死率为100%;浓度为300 mg/L时,对其雌蜱的产卵抑制率为100%,但对血红扇头蜱饱血若蜱完全无效;哒螨灵对三种蜱中血红扇头蜱饱血若蜱的杀伤力最强,且对长角血蜱饱血雌蜱的产卵有明显的抑制作用。试验表明,不同药物对不同蜱种和发育阶段的作用具有选择性,因此本试验为研制灭蜱制剂奠定了试验设计基础,同时为研究中可根据实际需要开发特定灭蜱药物或研制复方制剂提供建议。
蜱作为一种以吸血营生的体外寄生虫,常常对家畜造成一定危害,它不仅使被吸食动物出现贫血、营养不良、消瘦等症状,还会传播一些病原微生物导致动物发病,甚至死亡,一直困扰着畜牧业的发展。虽然蜱的种类颇多,但对微小牛蜱以外的蜱种研究不多,例如亚洲璃眼蜱、血红扇头蜱、长角血蜱等,其中亚洲璃眼蜱个体大,是西北地区的优势种,牛是主要宿主,可传播新疆出血热、Q热、斑点热等病;而血红扇头蜱作为犬科动物体外常见的蜱种,是埃立克体病、巴贝斯虫病及立克次氏体病的传播媒介,在宠物行业不可小觑;长角血蜱宿主广泛,主要分布在全球温带区域,是较常见的小型硬蜱[2-3],有报告显示蜱传斑点热群立克次体分子和新型布尼亚病毒与长角血蜱紧密相关[4-5]。
目前蜱的防治策略中药物灭蜱仍是最有效、最可行的。国际上对其防治的药物研究颇多。20世纪90年代以前多数国家用有机磷、拟除虫菊酯药物灭蜱;到了20世纪末由于一些高毒有机磷的禁用,加之蜱对陈旧的拟除虫菊酯类药物产生耐药性,因此近十年人们都将灭蜱药物的开发目光投向低毒的植物提取物,但多数植物提取物对成蜱,尤其饱血雌蜱的作用甚微。国外关于药物对微小牛蜱的杀伤效果的研究较多,但国内关于灭蜱药物的研究甚少,且我国蜱的种类繁多,寻找和研制新的灭蜱药物成为亟待解决的实际问题。针对上述情况,本研究将探讨不同药物是否对蜱种及不同发育阶段的蜱有选择杀灭作用。实验随机选择一些药物作用于血红扇头蜱、亚洲璃眼蜱和长角血蜱及其不同发育阶段,评价药物对蜱的杀伤效果,为研发杀蜱新制剂提供依据。
1、实验材料和方法
1.1 蜱的培养
蜱传代培养在中国农业科学院兰州兽医研究所寄生虫病研究室完成。寄生期在家兔的背部饲喂,非寄生期培养在温度26℃,湿度70%的室内培养箱内。实验家兔由中国农业科学院兰州兽医研究所动物场提供。
1.2试验药品
氟玲脲1号,5%乳油,上海沪联生物药业(夏邑)有限公司;氟玲脲2号,5%乳油,河北威远生物化工股份有限公司;噻虫啉1号,2%微囊悬浮剂,山东国润生物农药有限责任公司;噻虫啉2号,40%悬浮剂,利民化工股份有限公司;60g/L乙基多杀菌素,美国陶氏益农公司生产;20%哒螨灵可湿性粉剂,西安嘉科农化有限公司生产。
1.3 药物处理
将药物稀释成所需浓度(设置的工作浓度见表1),采用体外浸渍法处理蜱,浸渍5 min。饱血若蜱和饥饿成蜱处理组含10~15只蜱,饱血雌蜱处理组含5~10只蜱,每个处理组3个重复,浸渍之后用滤纸吸干蜱表面的药液,放入25~28℃温箱,保持70%的相对湿度。蒸馏水处理组作为阴性对照组。
1.4 实验观察和记录
每天观察处理后的蜱,包括蜱死亡、蜱重、产卵等情况。蜱死亡判定标准:若处理蜱为饱血若蜱则以不能蜕皮和发育到成蜱阶段的蜱视为死亡;若为饥饿成蜱,则可在药物处理后直接观察,无爬蹿情况,且用牙签触碰虫体依然没有反应的视为死亡。试验中需对饱血雌蜱称重,在处理1周后,收集雌蜱产出的卵并对其称重。
1.5 统计指标及数据处理
致死率(%)一死亡蜱数/实验蜱数×100;产卵指数(IE)=卵重/饱血雌蜱产卵前体重;产卵抑制率(%)=IE(对照组)- IE(处理组)/对照组IE×100,
实验利用EXCEL软件进行数据整理,采用SPPS19.O软件的单因素方差分析试验结果,半数致死量( LDso)用BLISS法计算。
2、实验结果
试验在设定的三个工作浓度下(表1),测定不同药物对不同种饱血若蜱的作用,结果显示氟玲脲1号和噻虫啉1号对亚洲璃眼蜱和血红扇头蜱饱血若蜱的致死率为100%;氟玲脲2号从低到高浓度对亚洲璃眼蜱饱血若蜱的致死率分别为9. 14%、13. 03%、30. 56%,对血红扇头蜱饱血若蜱的致死率分别为43. 33%、55. 10%、68. 99%;噻虫啉2号从低浓度到高浓度对亚洲璃眼蜱饱血若蜱的致死率分别为O、O、26. 67%;且氟玲脲1号和噻虫啉1号工作浓度远低于氟玲脲2号和噻虫啉2号,因此氟玲脲1号和噻虫啉1号灭蜱效果远远超过氟玲脲2号和噻虫啉2号(P<O. 01,详见表1)。
乙基多杀菌素从低浓度到高浓度对亚洲璃眼蜱饱血若蜱的致死率分别为72. 12%、100%、100%,对血红扇头蜱饱血若蜱的致死率均为O%,此数据表明乙基多杀菌素仅对亚洲璃眼蜱饱血若蜱有杀灭作用。此外乙基多杀菌素对亚洲璃眼蜱饱血雌蜱的产卵也有较强的抑制作用,当其浓度达到300 mg/L时,产卵抑制率力100%(详见表1、2)。
哒螨灵对血红扇头蜱饱血若蜱、亚洲璃眼蜱饱血若蜱、长角血蜱饥饿成蜱的LD。。分别为25. 42mg/L、183. 27mg/L、124. 53 mg/L,因此哒螨灵对血红扇头蜱饱血若蜱的杀伤力最强(详见表3)。与此同时,哒螨灵对长角血蜱饱血雌蜱的产卵有较强的抑制作用,当药物浓度为250 mg/L时,对其产卵抑制率达到99. 61%。
3、结论
通过本次试验显示,不同种药物对不同蜱种杀灭效果差异明显,不同厂家生产的杀虫药对同种蜱效果亦不相同,例如不同厂家生产的氟玲脲、噻虫啉对蜱的作用差别明显,这是药物本身对蜱无作用还是产品中含有其他有效成分,有待进一步证实。试验结果还表明,同一种药物对不同种蜱的效果差异明显,例如乙基多杀菌素对亚洲璃眼蜱饱血若蜱的杀伤效果明显,但对血红扇头蜱饱血若蜱没有作用,这可能是不同蜱种对外来毒物的抵抗机制不尽相同。此外同一种药物对同种蜱的不同发育阶段杀伤效果也有差异,例如哒螨灵对长角血蜱饥饿成蜱杀伤作用不大,但对其饱血雌蜱产卵有很强的抑制作用。
本次实验结果表明不同药物对不同蜱种杀灭效果参差不齐。目前国外相关研究报道的新灭蜱有效成分对蜱的杀灭作用效果单一,例如Prado - Ochoa证明氨基甲酸乙酯对雌性微小牛蜱的卵母细胞有损伤,但对其胆碱酯酶没有影响。尚无研究证明新的灭蜱药物可同时作用于不同蜱种及其不同发育阶段,且目前一些地区陆续出现对广谱性的有机磷类和菊酯类杀蜱药物的耐药蜱,研究探索新型广谱灭蜱药物的工作亟待解决。根据目前灭蜱药物的现状,我们可以尝试转换思路,例如在研制灭蜱药物时可开发对特定地区或动物体使用的灭蜱药,或者将对杀灭不同蛑有互补作用的药物联合研制出广谱性的复方制剂等,因此本次试验结果可为后期研发灭蜱制剂提供数据。
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