苹果轮纹病病原菌孢子田间释放监测方法研究

摘要　2009年采用雨水收集法和玻片黏着法监测了苹果轮纹病病原菌孢子田间释放动态，结果表明，采用这2种方法从5月中旬至8月下旬均能成功收集到苹果轮纹病病原菌孢子，所监测的孢子田间释放规律基本一致，即从5月14日开始监测到苹果轮纹病病原菌孢子，5月中下旬出现孢子释放小高峰，6月下旬至8月中下旬为孢子释放高峰期。雨水收集法可在宏观角度上研究大量苹果枝干轮纹病病瘤孢子释放规律，而玻片黏着法可在微观角度上研究单个苹果轮纹病病斑或病瘤甚至单个分生孢子器的孢子释放规律。

关键词　苹果　苹果轮纹病　孢子　田间监测　方法

环渤海湾苹果主产区为农业部确定的我国苹果两大优势产区之一，其气候及主要土壤类型适于生产优质苹果，但也适宜各种病害发生发展。山东省烟台市是环渤海湾苹果主产区中的主产地之一，苹果种植面积17.3万余hm²，年产量近400万t，其中红富士苹果种植面积占苹果种植总面积的80％以上。苹果轮纹病[Botrvosphaeda dothidea(MOUg.)Ces.＆DeNot]为环渤海湾苹果生产中的主要病害之一，尤其随着易感病品种红富士的广泛种植，该病在各地苹果园普遍发生，严重发病园果实发病率在40％以上，且苹果枝干轮纹病发生日趋严重。据调查，苹果枝干轮纹病在山东省发生最为严重，发病率达100％，病情指数达87.20。

当前，防治苹果轮纹病仍以化学药剂为主，由于果农缺乏对苹果轮纹病流行规律的深入了解，任意增加农药使用次数和使用量，不仅造成农药浪费，还会导致果品农药残留和环境污染。苹果轮纹病病原菌对多菌灵、戊唑醇等杀菌剂已产生了低水平抗药性。国内外学者关于苹果轮纹病防治方面的研究报道较多，而对苹果轮纹病流行监测方法鲜见报道。为此，2009年我们在山东省烟台市比较了雨水收集法和玻片黏着法对苹果轮纹病病原菌孢子的监测效果，可为监测苹果轮纹病孢子田间释放动态，针对性地防治病害，抗病育苗等研究工作提供科学方法与依据，现将结果报道如下。

1　材料和方法

1.1　试验园概况

供试品种为13年生高感苹果轮纹病的红富士苹果，试验地设在山东省烟台市农业科学研究院苹果园，该园具有10余年的种植苹果历史，果实和枝干苹果轮纹病发生严重。监测树常年均未喷施任何杀菌剂。

1.2　孢子田间释放监测方法

(1)雨水收集法在苹果园内选择3～5年生、苹果轮纹病病瘤较多的枝条，枝条的倾斜角度约45°，枝条段长30cm。在枝条段的上方和下方各绑扎布条，下方布条处挂1个细口瓶，上方布条下绑1个石块，下方布条头放入细口瓶内(图版3)。在监测果园内共选择10个枝条段，挂10个细口瓶，瓶内放人少量硫酸铜，防止收集到的孢子萌发。每次降雨后，收集10个细口瓶内所有雨水，并用5～10 mL的清水冲洗细口瓶2～3次，测量收集到的雨水和冲洗液体的总体积。将收集的液体摇动、混匀后，用血球计数板测量苹果轮纹病病原菌孢子的浓度，并计算孢子数。

孢子数(个)=总水量(mL)×孢子浓度(个／mL)。

(2)玻片黏着法　将玻片涂有凡士林的一面贴近苹果枝干轮纹病病斑和病瘤(图版3)，做好编号与标记，定点监测，每隔10天左右更换1次玻片。镜检玻片时，在100倍的显微视野下记录2行内苹果轮纹病病原菌孢子数。

1.3　监测时间

从苹果花序分离期直到10月底或11月初监测苹果轮纹病病原菌孢子田间释放动态，评价2种监测方法的优势。

2　结果与分析

雨水收集法和玻片黏着法2种方法均能从5月中旬至8月下旬收集到苹果轮纹病病原菌孢子。采用雨水收集法，从5月14日开始监测到苹果轮纹病病原菌孢子，5月中下旬出现孢子释放小高峰，6月下旬至8月中下旬为孢子释放高峰期。7月21日收集的孢子数最多，为127916个；8月21日次之，为80514个；7月12、14日收集的孢子数均在4万个以上；6月20日和7月9日收集的孢子数均在2万个以上；7月26日和8月27日孢子数均大于1万个(表1)。该收集方法监测到的孢子数明显多于玻片收集的孢子数，这是由于所选择的枝条段含有大量苹果轮纹病病斑和病瘤，体现了苹果轮纹病病原菌孢子释放动态的整体水平。

采用玻片黏着法，同样是在5月14日开始监测到苹果轮纹病病原菌孢子，5月中下旬出现孢子释放小高峰。7月23、30日收集的孢子数最多，分别为1060、1030个；其次为8月21日和7月14日，收集的孢子数分别为678、485个(表1)。孢子释放高峰期同雨水收集法的结果基本一致，但孢子数远远低于雨水收集法。这与玻片黏着法的特点有关，该方法主要将玻片贴近单个苹果轮纹病病斑，导致了菌源数量较少，但该种方法可从微观上体现单个病斑或病瘤的孢子释放特点，还可研究与评价单个分生孢子器释放孢子的能力。

3　结论与讨论

本研究评价了雨水收集法和玻片黏着法收集苹果轮纹病病原菌孢子的效果。这2种方法分别可在宏观和微观角度上研究苹果轮纹病病原菌孢子的田间释放规律，从而为深入开展苹果轮纹病病原菌孢子群体特性和个体特性等方面研究提供技术与方法。孢子释放与否同降水关系密切，只有在降水后才能监测到孢子，且释放出的孢子随着雨水流动进行传播与侵染。因2009年后期元降水；雨水收集法和玻片黏着法分别在8月27日和9月11日后均未能收集到病原菌孢子。陈功友曾提到苹果轮纹病病原菌孢子的分生孢子器自2月开始开口释放孢子，在5-6月为释放高峰期。本试验监测的烟台地区苹果轮纹病病原菌孢子释放始期、高峰期与陈功友报道的有所不同，这可能与不同地区气候条件有差异等因素有关。

苹果轮纹病可严重为害苹果果实和枝条，从而导致大量烂果，削弱树势，严重时死枝，尤其是可引起花、芽、枝死亡，造成的损失不可估量。苹果轮纹病主要侵染来源为枝干，确定该病病原菌孢子的监测方法，可有针对性地开展苹果枝干轮纹病病斑孢子释放动态的研究，对于确定防治关键期具有十分重要的作用。

参考文献

1　高艳敏，沈永波；张恩尧，等，苹果轮纹病发生规律及条件的研究，安徽农业科学

2　国立耘，李金云，李保华，等；中国苹果枝干轮纹病发生和防治情况，植物保护

3　刘学卿，王培松，杨永杰，等，4种杀菌剂组合在套袋苹果上的应用效果，中国果树