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胚胎移植

胚胎移植又称受精卵移植，就是将1头母畜(供体)的受精卵移植到另一头母畜(受体)的子宫内，使之正常发育，俗称“借腹怀胎”。
　　(一)胚胎移植的意义
　　1．充分发挥优良母牛的繁殖潜力一般情况下，1头优良成年母牛一年只能繁殖1头犊牛，应用胚胎移植技术，一年可得到几头至几十头优良母牛的后代，大大加速了良种牛群的建立和扩大。
　　2．诱发肉牛产双胎对发情的母牛配种后再移植一个胚胎到排卵对侧子宫角内。这样配种后未受孕的母牛可能因接受移植的胚胎而妊娠，而配种后受母牛则由于增加了一个移植的胚胎而怀双胎。另外，也可对未配种的母牛在两侧子宫角各移植一个胚胎而怀双胎，从而提高生产效率。
　　3．应用胚胎移植还可以减少肉用繁殖母牛的饲养头数，可以代替种畜的引进和保存品种资源等。
　　(二)胚胎移植的生理基础
　　1．母牛发情后生殖器官的孕向发育在发情后的最初一段时期(周期性黄体期)，不论是否已受精，母牛生殖系统均处于受精后的生理状态之下，在生理现象上，妊娠与未孕并无区别。所以，发情后的母牛生殖器官的孕向变化，是进行胚胎移植时使不配种的受体母牛可以接受胚胎，并为胚胎发育提供各种条件的主要生理学依据。
　　2．早期胚胎的游离状态胚胎在发育早期有相当一段时间(附植之前)是独立存在的，它的发育基本上靠本身贮存的养分，还未和子宫建立实质性联系。所以，在离开活体情况下，在短时间内可以存活。当放回与供体相同的环境中，即可继续发育。
　　3.胚胎移植不存在免疫问题受体母畜的生殖道(子宫和输卵管)对于具有外来抗原物质的胚胎和胎膜组织，一般来说，在同一物种之内，并没有免疫排斥现象，这一点对胚胎由一个体移植给另一个体后而继续发育极为有利。
　　4．胚胎和受体的联系移植的胚胎，在一定时期会和受体子宫内膜建立生理上和组织上的联系，从而保证了以后的正常发育。此外，受体并不会对胚胎产生遗传上的影响，不会影响胚胎固有的优良性状。
　　(三)胚胎移植的操作原则
　　1．胚胎移植前后所处环境的一致性即胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应。包括生理上的一致性(即供体和受体在发情时间上的一致性)和解剖位上的一致性(即移植后的胚胎与移植前所处的空间环境的相似性)以及种属一致性(即供体与受体应届同一物种，但并不排除种间移植成功的可能性)。
　　2．胚胎收集期限胚胎收集和移植的期限(胚胎的日龄)不能超过周期黄体的寿命，最迟要在周期黄体退化之前数日进行移植。通常是在供体发情配种后3一s日内收集和移植胚胎。
　　3.在全部操作过程中，胚胎不应受到任何不良因素(物理的、化学的、微生物的)的影响而危及生命力。移植的胚胎必须经鉴定并认为是发育正常者。
　　(四)胚胎移植的基本程序胚胎移植的基本程序包括供体超排与授精，受体同期发情处理、采卵、检卵和移植。关于超排和同期发情处理在前面已有叙述，本书仅介绍采卵、检卵和移植。
　　1．胚胎回收(采卵) 从供体收集胚胎的方法肴手术法和非手术法两种。
　　(1)手术法按外科剖腹术的要求进行术前准备。手术部位位于右肋部或腹下乳房至脐部之间的腹白线处切开。伸进食指找到输卵管和子宫角，引出切口外。如果在输精后3—4天期间釆卵，受精卵还未移行到子宫角，可采用输卵管冲卵的方法。将一直径2毫米，长约10厘米的聚乙烯管从输卵管腹腔口插入2—3厘米，另用注射器吸取5—10毫升30℃左右冲卵液，连接7号针头，在子宫角前端刺人，再送人输卵管峡部，注入冲卵液。穿刺针头应磨钝，以免损伤子宫内膜；冲洗速度应缓慢，使冲洗液连续地流出。如果在输精后5天收胚，还必须做子宫角冲胚。即用10一15毫升冲卵液由宫管结合部子宫角上部向子宫角分叉部冲洗。为了使冲卵液不致由输卵管流出，可用止血钳夹住宫管结合部附近的输卵管，在于宫角分叉部插入回收针，并用肠钳夹住子宫与回收针后部，固定回收针，并使冲卵液不致流人子宫体内。
　　(2)非手术法非手术采卵一般在输精后5—7天进行。可采用二路导管的冲卵器。二路式冲卵器是由带气囊的导管与单路管组成。导管中一路为气囊充气用，另一路为注入和回收冲卵液用。
　　导管中插1根金属通杆以增加硬度，使之易于通过子宫颈。一般用直肠把握法将导管经子宫颈导人子宫角。为防止子宫颈紧缩及母牛努责不安，采卵时可在腰荐或尾椎间隙用2％的普鲁卡因或利多卡因5—10毫升进行硬膜外腔麻醉。操作前洗净外阴部并用酒精消毒。为防止导管在阴道内被污染，可用外套膜(有商品出售)套在导管外，当导管进人子宫颈后，扯去套膜。将导管插入一侧子宫角后，从充管向气囊充气，使气囊胀起并触及子宫角内壁，以防止冲卵液倒流。然后抽出通杆，经单路管向子宫角注入冲卵液，每次15—50毫升，冲洗5—6次，并将冲卵液收集在漏斗形容器中。为更多地回收冲卵液，可在直肠内轻轻按摩子宫角。用同样方法冲洗对侧子宫角。
　　冲卵液多数为组织培养液，如林格氏液、杜氏磷酸盐缓冲液(PE)、布林斯特氏液(BMOC-3)和TCM—199等。常用的为杜氏磷酸盐缓冲液，加入0．4％的牛血清白蛋白或1％一10％犊牛血清。
　　冲卵液温度使用时应为35—37℃，每毫升要加入青霉素1000国际单位，链霉素500—1000微克，以防止生殖道感染。
　　2．胚胎检查
　　(1)检卵将收集的冲卵液于37℃温箱内静置10一15分钟。胚胎沉底后，移去上层液。取底部少量液体移至平皿内，静置后，在实体显微镜下先在低倍(10一20倍)下检查胚胎数量，然后在较大倍数(50—100倍)下观察胚胎质量。
　　(2)吸卵吸卵是为了移取、清洗、处理胚胎，要求目标准确，速度快，带液量少，无丢失。吸卵可用1毫升的注射器装上特别的吸头进行，也可使用自制的吸卵管。
　　(3)胚胎质量鉴定正常发育的胚胎，其中细胞(卵裂球)外形整齐，大小一致，分布均匀，外膜完整。无卵裂现象(未受精)和异常卵(外膜破裂、卵裂球破裂等)都不能用于移植。
　　3．胚胎移植
　　(1)手术移植先将受体母牛作好术前准备。已配种母牛，在右肋部切口，找到非排卵侧子宫角，再把吸有胚胎的注射器或移卵管刺入子宫角前端，注人胚胎；未配母牛在每侧子宫角各注入一个胚胎；然后将子宫复位，缝合切口。
　　(2)非手术移植非手术移植一般在发情后第六至第九天(即胚泡阶段)进行，过早移植会影响受胎率。在非手术移植中采用胚胎移植枪和0．25毫升细管移植的效果较好。将细管截去适量，吸入少许保存液，吸一个气泡，然后吸人含胚胎的少许保存液，吸人一个气泡，最后再吸取少许保存液。将装有胚胎的吸管装入移植枪内，通过子宫颈插入子宫角深部，注入胚胎。非手术移植要严格遵守无菌操作规程，以防生殖道感染。

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