动物凝血和抗凝血功能的检查及临诊意义

张 鹏 （黑龙江省牡丹江市动物卫生监督所 157000）

1 止血和凝血机制

在生理状态下，血液中有少量纤维蛋白生成，并覆盖在血管内膜上，保护血管内皮，以维持血管的正常通透性，同时生成的纤维蛋白又被纤维蛋白溶酶所溶解，凝血与纤溶处于动态平衡状态，保持机体不出血，也无血栓形成，血液是流体状态而循环于全身。当这种平衡失调时，便可导致出血不止或形成血栓，即止血与凝血障碍。止、凝血障碍的机制十分复杂，其涉及微血管、血小板、各凝血因子、抗凝因子及纤维蛋白溶解系统等诸多因素。在正常时止、凝血系统与抗凝血和纤维蛋白溶解系统处于动态平衡状态，遂能既无出血也无血栓形成。若止、凝血活性减弱或抗凝血及纤溶活性增强则会引起低凝状态发生出血症状。相反会引起高凝状态或导致血栓形成。前者临床上统称为出血性疾病，后者统称为血栓性疾病。

2 凝血功能检查

凝血时间测定。静脉血放在玻璃试管中，观察自采血开始至血凝所需的时间称为凝血时间。该试验是反映自因子Ⅶ被负电荷表面（玻璃）激活，至纤维蛋白形成，一连串的复杂酶反应所需的时间，主要反映内源性凝血过程第一期有无异常。在大手术或肝、脾穿刺前进行本项测定，可以及早发现出血性素质疾病，以防大量出血。凝血时间延长，血浆内任何一种凝血因子的缺陷，几乎都可引起凝血时间延长，见于凝血因子Ⅷ、Ⅸ、维生素K缺乏及伴有弥漫性血管内凝血（DIC）的重剧疾病等。

出血时间测定。出血时间是指皮肤毛细血管经人工刺伤出血后到自然止血所需的时间。出血时间的长短主要与血管壁的完整性，收缩功能，血小板数量与功能，血浆中含量等有关。上述各种因素有缺陷时，出血时间可见延长。方法是在动物的耳尖部剪毛消毒后，用细针头刺入3~4毫米，血液即自动流出，每隔半分钟，用滤纸吸取血滴1次，如此，则纸上血迹逐渐缩小，出血停止时则不再留有血迹。计算血液流出到血迹消失之间的时间，即为出血时间。本法试验的出血时间，正常马为2~3分钟。当血小板大量减少，肝脏受损害，维生素K缺乏可使出血时间延长，动物患血斑病时，出血时间可显著延长到20~30分钟。

活化部分凝血活酶时间（APTT）测定。组织凝血活酶是脂蛋白，用于测定凝血酶原时间，这种完整的脂蛋白称为完全凝血活酶。用氯仿或乙醚自完全凝血活酶中浸提出来的物质则称为部分凝血活酶，其参与Ⅸa和Ⅹa的凝血作用。该试验是在血浆巾加入APTT试剂（接触因子激活物和磷脂）和钙离子后，观察其凝血时间。如以白陶土为接触因子激活物，也可称为白陶土部分凝血活酶时间（KPTT）。本试验是内源性凝血功能的综合性检查。

临床检查时，应与健康动物进行对照试验，判定在延长时间10秒以上为异常（www.nczfj.com）。APTT延长主要见于严重的肝脏疾病、维生素K缺乏、DIC等。血浆凝血酶原时间（PTT）测定，通常称为凝血酶原时间（PT）测定。在被检血浆中加入钙离子和第Ⅲ因子，测定其凝固时间即血浆凝血酶原时间，外源性凝血系统中因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ质或量异常时影响此试验，是外源性凝血活性的综合性检查。PT缩短见于血液高凝状态如DIC早期、乙醚麻醉后等。PT延长主要见于严重的肝脏疾病、维生素K缺乏、DIC后期等。

3 抗凝功能检查

凝血酶凝固时间测定。在被检血浆中加入标准凝血酶溶液，测定其凝固时间即凝血酶凝固时间。当纤维蛋白原明显减少或有结构异常，或血循环中有抗凝血物质时，该试验时间延长。其临床意义主要见于循环血液中AT-Ⅲ活性明显增高，严重肝脏疾病、过敏性休克及发生DIC时。

抗凝血酶-Ⅲ测定。常用的方法有凝血法、免疫学检查法、酶学测定法等。凝血法，将除去纤维蛋白原的被检血浆和一定量的凝血酶相互反应后，凝血酶的一部分被检标本中的AT-Ⅲ中和而失去活性，再加入纤维蛋白原溶液测定其凝固时间，此时间决定于剩余凝血酶的含量。免疫学检查法，有AT-Ⅲ抗体进行单相免疫扩散、胶乳凝集、火箭电泳、激光散射测浊或近红外比浊等方法加以测定，得出AT-Ⅲ的抗原含量。酶学测定法，在标本中加入一定量的肝素，形成AT-Ⅲ肝素复合物，此复合物即迅速地和凝血酶结合成为AT-Ⅲ肝素凝血酶复合物，被结合的凝血酶即失去活性，再加入对凝血酶特异性很高的产色肽合成基质，以测定剩余凝血酶的活性，由此估算AT-Ⅲ的抗凝血酶活性。