动物抗原和抗体检测的方法

王玲 （黑龙江省绥滨县畜牧兽医局 156200）

检测动物的抗原和抗体有沉淀反应、凝集反应、补体参与抗原抗体反应。下面介绍前两种。

1 沉淀反应

适量的可溶性抗原和相应抗体在溶液和凝胶中结合后形成的复合物，可成为肉眼可见的不溶性沉淀物，称为沉淀反应。利用该反应进行的血清学试验，称为沉淀试验。根据操作方法的不同，可将沉淀试验分为以下几种。

环状沉淀试验。先将已知抗血清加于玻璃细管中约1/3高度，再沿管壁缓缓滴加等容积抗原溶液，使成为分界清晰的两层，在室温或37℃放置几分钟至30分钟后，若在两种溶液的界面出现白色沉淀环，即为阳性反应。该试验在兽医临床上主要用于炭疽的诊断。

絮状沉淀试验。可溶性抗原与抗体以适当比例在试管内或玻片上混合，在电解质存在的情况下，若出现絮状沉淀物，即为阳性反应。沉淀量与抗原、抗体的比例关系极大。以抗体量恒定为例，当抗原量逐渐增加时，形成沉淀物的量从无到有，达到最大值，随之又逐渐递减到零。整个试验可分为三个区，即抗体过多区，抗原、抗体浓度平衡区以及抗原过多区。在平衡区内，沉淀物出现最早、量最多，离心后上清液中无游离抗原和抗体，此时为抗原和抗体的最适比例。该试验常用于毒素、类毒素、抗毒素的定量测定。

凝胶中沉淀试验。主要利用可潜性抗原和相应抗体在凝胶中的扩散，形成梯度浓度，在抗原、抗体比例适当处就会互相结合，形成肉眼可见的沉淀线或环。根据抗原和抗体反应的方式和特征，分为单向琼脂扩散试验，双向琼脂扩散试验以及与电泳技术相结合的免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳、放射火箭电泳等。单向琼脂扩散试验系将抗体混合于琼脂内，制成含抗体的琼脂板，然后于琼脂板上打孔，再将抗原加入孔中，此时抗体不会扩散，而抗原可向四周扩散，与琼脂中的相应抗体形成沉淀环，沉淀环的大小与加入的抗原量成正比。如之前用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知样品中的抗原含量即可通过标准曲线求出。大多数动物血清中的总免疫球蛋G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）或免疫球蛋白A（IgA）的含量可用该方法测定。双向琼脂扩散试验系将抗原与抗体分别注入琼脂板上有一定间距的小孔内，相互扩散，两者在合适比例处相遇时即形成一条白色沉淀线。在一块琼脂板上打三个孔，二个孔中加入抗原，一个孔中加入抗体，可出现几种类型的沉淀线，二条沉淀线互相融合相连，说明两种抗原完全相同，属同一性反应。二条沉淀线交叉而过，说明两种抗原完全不同，称为非同一性反应。二条沉淀线既相融合，但又多出一个小刺，说明两种抗原之间部分相同，称为部分同一性反应。在兽医临床上，琼脂扩散试验已广泛用于传染病的诊断，如马之氏传染性贫血症、牛白血病、羊蓝舌病、鸡马立克氏病和鸡传染性法氏囊病的琼脂扩散试验已成为其流行病学调查和检疫的主要手段。免疫电泳法是先将待检样品放在琼脂板小孔中进行电泳，然后在琼脂板的适当地方挖一平行的沟槽，加入已知相应的抗血清做双向扩散，在最适当比例处形成沉淀弧。根据沉淀弧的数量、位置和外形，对样品中所含成分及其性质做出分析。该技术在临床上可用于低γ球蛋白血症、异型蛋白血症和特异性亚型免疫球蛋白缺乏症的辅助诊断。

2 凝集反应

某些病原微生物和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，（www.nczfj.com）在有适量电解质存在下，可逐渐聚集，终则出现肉眼可见的凝集小块，称为凝集反应。根据这一原理建立的凝集试验，在临床免疫学检验中应用颇多。

细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原与相应抗体直接结合而出现的凝集现象，称为直接凝集试验。该试验呈抗原、抗体特异性，因此只需知道其中一种反应物（抗原或抗体）的属性，即可根据反应结果，判断受检物中有无相应的抗体或抗原存在。该法主要用于检测血清中有无某种特异性抗体，鉴定细菌的血清型及输血时在受血者与供血者之间的红细胞及血清是否相合等试验。

将可溶性抗原或抗体吸附于一种与免疫反应无关的、一定大小的颗粒状物体（通常是红细胞）的表面，然后与相应的抗体或抗原作用，在有适宜电解质存在的条件下，发生被动的凝集现象，称为间接凝集试验或被动凝集试验。该法敏感性极高，但如操作条件要求并不十分严格，则易受到各种理化因素的干扰而发生自凝或非特异性凝集，故需设有严密的对照。该法现已用于多种传染病的诊断，也可用于检测自身抗体如风湿病因子（RF）的检测。国外已用该法研制出检测血清IgG和与怀孕有关激素的试剂盒。

某些病毒具有红细胞受体，当病毒与红细胞在一起孵育时可以直接引起凝集，这种现象称为血液凝集。与兽医有关的能引起血液凝集的病毒有正粘病毒、副粘病毒、肠病毒和腺病毒等。血液凝集现象本身在免疫学上并不重要但抗血清具有阻止由病毒红细胞受体引起的血液凝集的能力，人们利用这一点建立了一种称为血凝抑制试验（HI）的血清学试验。他可用于测定病毒抗体的滴度、病毒的初步鉴定及病毒数量的测定等。应用HI试验检测鸡新城疫和产蛋减少综合征抗体以判断其免疫状况，是该法在兽医临床上应用的典范。

抗球蛋白反应用于检测不完全抗体。由于不完全抗体的体积小，长度短，不能同时与双方抗原决定簇连接，因此不能出现直接可见的凝集反应。据报道，有人曾把含不完全抗体的球蛋白注射到异种动物，使之产生一种抗球蛋白抗体，而这种抗球蛋白抗体加到那种抗原与不完全抗体的复合物中能起到一种搭桥作用，从而出现可见的凝集反应，后称该反应为Coombs试验，并广泛用于自身免疫性溶血性贫血的诊断。