额敏县弓形虫病的血清学调查

       弓形虫病是由刚第弓形虫（Toxoplasma gondii）引起的一种人畜共患原虫性疾病。1908年法国学者Nicolle和Manceaux在北非刚第最早发现，虫体呈弓形，敌命名为刚第弓形虫。
　　弓形虫的感染在人和动物中很常见。家畜感染弓形虫病后，一般无明显的临床症状，通常呈亚临床症状，或隐性感染，但也可呈散发性发病或急性暴发流行。于恩遮于1955年在我国福建省首次发现该病。20世纪80年代，我国有多个省、市、自治区相继报道了猪感染弓形虫病的情况。新疆自1989年证实有弓形虫病以来，1992年首次分离到3株弓形虫，此后陆续开展了一些调查及研究工作，但调查工作大都局限于人，对畜禽的调查很少，为了摸清新疆额敏县主要畜禽弓形虫病的感染情况，我们采用了微量间接血疑实验（IHA），用于检测牛，羊，猪，鸡，犬和猫的动物血清，定性测定其抗体效价，结果如下：
　　1 材料与方法
　　1.1 材料
　　额敏县牛羊屠宰场，额敏县兽医站共采集各种动物血样1085份。
　　1.1.1 试剂及仪器
　　弓形虫IHA抗原（批号：070618），稀释液（批号：070613），阳性，阴性血清；购于血清中国农科院兰州兽医研究所。96（12×8）孔110。V形有机玻璃反应办，100ul微量加样器，振荡器，小型离心机，移液管等。
　　1.1.2 被检血清牛血清：上户86份，种羊场150份；
　　羊血清：突击294份，二道桥30份，郊区85份。
　　猪血清：种羊场115份；
　　鸡血清：蛋鸡上户50份，郊区137份（包括二道桥30份，突击46份）；
　　犬血清：种羊场54份，二道桥42份；
　　猫血清：种羊场26份，二道桥16份。
　　1.2 试验方法
　　1.2.1 血清分离
　　无菌采取被检动物静脉血3～5ml。将所采样斜置于37℃恒温培养箱中1h，之后置于4℃冰箱中，待其折出血清；或1500～2000r/rain离心3min分离血清，凡有溶血者弃之不用。（www.nczfj.com）将分离血清-20℃保存备用。
　　1.2.2 检测方法
　　弓形虫IHA诊断抗原按瓶上标示毫升数加入灭菌蒸馏水稀释液摇匀，1500删miLL离心5～10win，弃上清液，加等量稀释液摇匀，4℃静置24h后使用。
　　用微量加样器往96孔板每孔加75ul稀释液。每个样品加4孔。每块板设阳性，阴性对照。对照均加8孔。
　　往各组第1孔加25ul的被检血清，或阳性血清，或阴性血清。
　　用加样器对每组进行1∶4系列稀释。被检血清组稀释至第3孔。阳、阴性对照组稀释至第7孔。被检血清组第4孔，阳，阴性对照组第8孔为稀释液。将IHA诊断抗原摇匀，加25ul于每孔中。之后将反应板置微型振荡器上振荡1～2s，直至诊断夜中的雪球分布均匀，用干净的玻璃板或纸板盖住反应板，置22～37℃静置2～3h后观察结果。
　　1.2.3 判定方法
　　在阳性对照血清滴度不低于1∶1024（第5孔）；阴性对照血清除第1孔允许存在前滞现象（+）外，其余各孔均为（-）；稀释液对照为（-）的前提下，对被检血清进行判定，否则应重做。间接血凝试验的判定标准如下：
　　“++++”：100%红细胞在孔壁下部呈均质的膜样凝集。边缘整齐，致密。因重力关系，膜样凝集的红细胞有时出现下滑现象。
　　“+++”：75%的红细胞在孔壁下部呈膜样凝集，不凝集的红细胞在孔低中央集中成很小的圆。
　　“++”：50%的红细胞在孔壁更下部呈稀疏的凝集，不凝集的红细胞在孔低中央集中成较大的圆点。
　　“+”：25%的红细胞在孔低凝集，其余不凝集的红细胞在孔低中央集中成大的圆点。
　　“-”：所有的红细胞均不凝集。并集中于孔低中央呈规则的最大的圆点。
　　被检血清第3孔（1∶64稀释）达到“++”或以上，将被检样品判为阳性。被检血清第3孔（1∶64）为“+”或“-”，将被检样品判为阴性。
　　2 结果
　　本次调查过程中，新疆额敏县家畜中羊的感染率最高，其次是猪，再次是牛，阳性率分别为5.62%，3.48%和2.54%。种羊场的弓形虫病阳性感染率性相对较高为7.14%。蛋鸡和肉鸡的弓形虫病阳性感染率为0%。随着宠物的兴起，作为弓形虫惟一终末宿主的猫以及起机械传播作用的犬与人们的关系越来越密切，在弓形虫病的传播中起着尤为重要的作用，在本次调查中，猫和犬感染较高，阳性率分别为7.14%和4.17%。
　　新疆畜禽弓形虫病阳性率低于国内一些报道。王权2006年报道上海犬的阳性率为13%，陆艳2005年报道青海省猪，绵羊阳性率分别为7.19%和4.38%，王天奇2006年报道洛阳猪阳性率为16.5%，于咏兰2006年研究报道北京地区犬和猫的感染率分别为13.21%和14.06%。其主要原因可能新疆属于干旱地区，卵囊在干旱的土壤中不利于传播有关，这也与李国清1990年德观点相同；其次是由于新疆土地资源广阔，饲养区域相对较大，感染弓形虫病的几率相对较小；再次是由于近15年来随着畜禽规模化，集约化养殖逐渐增多，改变了以往家庭式的牛、羊、鸡、猪、犬、猫混养的方式，减少了弓形虫病的传播机会。