胶体金快速诊断技术在对动物疫病诊断中的应用

       胶体金快速诊断技术是指在现场或试验室对动物疫病进行快速诊断的一种方法，具有方便快捷、特异敏感、稳定性强、不需要特殊设备和试剂、价格低廉、结果判断直观的特点，特别适合于基层。本项技术推广主要是应用快速诊断方法对我市辖区内的主要动物疫病进行诊断、预警监测，以全面掌握疫情动态，为制订防控方案提供基础依据，达到降低疫病发病率的目的。选择养猪场4个，养鸡场4个，用胶体金快速诊断技术和常规诊断技术分别进行监测诊断，猪场发病率降低了9.35%，死亡率降低了5.24%，鸡场发病率降低了13.25%，死淘率降低了5.52%。目前，胶体金诊断技术在我市诊断、监测病种达7种，为养殖场挽回大量经济损失，社会效益和环保效益显著。
　　1 多点控制示范试验
　　1.1 试验畜禽场选择
　　2010年3月至今，根据我市各区养殖畜禽种类分布，选定了遵化市崔家庄乡印华养猪场，刘备寨乡久顺养猪场，崔家庄乡宏泰养猪场，兴旺寨乡寿松养猪场；遵化市平安城镇张贵民养鸡场，崔家庄乡宁九方养鸡场，平安城镇建忠养鸡场，崔家庄乡靳广田养禽场为试验示范场，前两个猪/鸡场使用快速诊断技术，后两个猪/鸡场使用常规诊断技术。
　　1.2 胶体金检测卡选择
　　深圳康百得生物科技有限公司、北京新胜安科技发展有限公司等生产的猪瘟、H5禽流感、H9禽流感、蓝耳病、伪狂犬病、圆环病毒、口蹄疫等病原、抗体诊断产品。
　　1.3 工艺技术路线
　　畜禽饲养场→用常规监测诊断技术（对照场）和胶体金快速监测技术（试验场）→确诊疫病或判定抗体高低→调整免疫程序，及时免疫、合理用药→控制疫病发生或发展。
　　1.4 胶体金检测卡的使用方法与判定
　　A 根据所要检测的项目选择所需的检测卡；
　　B 将检测卡从铝箔袋中取出，水平放置并做好标记；
　　C 取血液或棉拭子加入稀释液中，混匀后吸取2～4滴稀释液滴入检测卡的检测孔内；
　　D 待稀释液慢慢渗过显示区，20min内观察并记录结果。
　　E 结果判定：
　　阳性：显示区中对照线（C）和检测线（T）各出现1条紫红色线，说明抗原或抗体存在，为阳性反应；
　　阴性：只在对照线区（C）出现1条紫红色线，说明无抗体或无抗原病毒感染；
　　无效：对照区未出现紫红色线或只在检测线区（T）出现紫红色线，说明胶体金无效，不能使用。
　　1.5 试验结果与分析
　　1.5.1 养猪场的试验结果
　　经1年的比较试验，试验场较对照场发病率、死亡率分别降低了9.35%、5.24%，详细数据见表1。
　　表1 养猪场多点控试试验结果一览表（单位：头、%）
　　经卡方检验（x2test），试验前后发病率、死亡率x2值分别为29.54、32.02，从x2界值表查得υ=1时，α=0.05、α=0.01的x2值分别为3.84、6.63，发病率、死亡率x2值均大于α=0.01的x2值，即P<0.01，差异极显著，说明该项技术的应用对降低养猪场猪只发病率、死亡率具有显著作用。
　　1.5.2 养鸡场的试验结果
　　经1年的比较试验，试验场较对照场发病率、死淘率分别降低了13.25%、5.53%，详细数据见表2。
　　表2 养鸡场多点控试试验结果一览表（单位：头、%）
　　经卡方检验（x2test），试验前后发病率、死亡率x2值分别为414.17、129.93，均大于α=0.01的x2值，即P<0.01，差异极显著，说明该项技术的应用对降低养鸡场鸡的发病率、（www.nczfj.com）死淘率具有显著作用。
　　2 技术要点
　    2.1 建立防疫档案
　　规模养殖场均要建立防疫档案、详细记录生产状况、发病情况、诊断情况、发病率和死亡率、免疫程序、免疫时间、所用疫苗生产厂家和疫苗批号、监测时间、（www.nczfj.com）监测病种和检测结果等有关生产和防疫的相关内容，以备诊断和监测时参考。
　　2.2 疫病诊断
　　2.2.1 诊断病种的确定
　　胶体金使用前，依据发病的临床症状、传播速度、病理变化等临床特征，进行初步诊断，然后选择相应疫病的胶体金检测试纸进行检测。
　　临床上不能排除的高致病性禽流感、高致病性猪蓝耳病等烈性传染病要先进行检测，排除后再进行其他疫病的检测。怀疑为多种疫病混合感染的，选择多种疫病检测试纸同时进行检测。
　　2.2.2 检测数量
　　每次诊断检测数量不低于3头（只）份，有1头只份出现阳性的即判定该养殖场有该病原感染。
　　2.3 免疫效果监测
　　使用免疫抗体检测试纸对免疫后的动物进行定期检测，不少于20头（只）份/场次，检测合格率低于70%时要进行加强免疫。
　　2.4 流行病学调查
　　2.4.1 区域性某种疫病的病原学调查
　　根据调查区域内养殖分布，结合地理特征确定疫病监测场点，但不少于2个养殖场/乡镇、2个自然村/乡镇，采集样本数量不少于20头（只）份/次。定期开展病原学检测。
　　2.4.2 养殖场的病原分布调查
　　将养殖场内散养的动物按种类、日龄分群，按群随机进行样品采集，不少于5头份/群次，分别进行病原和免疫抗体检测，统计结果，绘制病原分布图和免疫抗体合格率曲线图，结合该场疫病流行情况分析该病的高发日龄和免疫程序是否合理，制定防控措施。
　　3 技术关键
　　（1）所采集的样本具有代表性，以确保检测结果的可信度。
　　（2）胶体金使用应严格按程序步骤操作。
　　（3）以流行病学调查和血清学、病原学检测结果相结合，确定畜禽疫病的高发时段，从而及时免疫用药以防控重点疫病。
　　4 创新点
　　（1）此项技术方便快捷，不需要特殊设备和试剂，可在野外、田间现场操作，特别适合于基层畜禽疫病监测和诊断。
　　（2）此项技术特异敏感，稳定性强，检测诊断准确率较高。
　　（3）试剂价格低廉、经济适用。