胆红素、胆固醇、肝素常见生化药品的提取方法

       一、胆红素
　　利用猪胆汁提取胆红素，工序如下：
　　1. 取新鲜胆汁用纱布过滤，除去杂质。
　　2. 在盛胆汁的缸中加入澄清石灰水，石灰水量冬季为胆汁量的3.5倍，夏季为4倍。
　　3. 把胆汁和石灰水充分搅拌后慢慢加热，温度升到50～60℃时，除去表面浮起的白沫。
　　4. 当温度升到60℃时，开始出现胆红素钙盐小颗粒，当温度升到95℃时，液面就会浮起一层橘黄色的胆红素钙盐。
　　5. 将胆红素钙盐从缸中捞出，再用细纱布过滤，然后将滤下的胆红素钙盐用热水冲洗干净。
　　6. 将洗净的胆红素钙盐倒入盆中，再倒入相当于胆红素钙盐1倍量的水，研成糊状。
　　7. 在胆红素钙盐糊中加入1%亚硫酸氢钠，并不断搅拌，随后缓慢滴加1∶1的稀盐酸，使pH值保持在1～2。
　　8. 静置15分钟后，用细纱布滤去酸液，让其慢慢聚结成深红色的团块。
　　9. 将少量浓度90%以上的酒精加入深红色的团块中，让团块溶解成糨糊状。
　　10.在糊状物中加入10倍量浓度90%以上的酒精和0.5%亚硫酸氢钠，调整pH值到3～4，静置16小时。
　　11.沉淀后，吸去上面的清亮液，将底部的沉淀物再用10倍量的酒精洗涤1次，即可得到粗制的胆红素。
　　粗制的胆红素可交售给生化制品厂，再进一步加工为精制胆红素。
　　二、孕马血清
　　孕马血清（PMSG）在畜牧生产中应用广泛，它能促进母畜的卵巢功能恢复，诱发母畜发情和超数排卵，治疗公、母畜的性机能衰退，使猪、羊、兔等多胎多产，是提高养殖业经济效益的激素药物。
　　孕马血清的提取方法：选取妊娠60～100天的健康母马（查明胎儿是马而不是骡），颈静脉采血，每次1000～2000毫升，将采集的血液盛于已经消毒、干燥过的长筒状玻璃容器中，然后置于温室中使其迅速凝固。为了更多地析出血清，可在血凝后压上一重物（如砝码）。一般每100毫升血液可析出45～50毫升血清，(www.nczfj.com)将析出的血清吸出，分装备用。如暂时不用，可以加入0.5%石炭酸防腐，放入冰箱，可保存一年不变质。
　　三、胆固醇
　　胆固醇是一种医药和化工原料，是人工牛黄的成分之一，可作为原料合成其他甾体化合物，如维生素D3等。
　　从动物脑、脊髓中提取胆固醇，先将脑、脊髓制成干燥物，用丙酮选择性提取胆固醇。将丙酮提取液蒸发到近乎干燥，加入适量95%乙醇，加热使其残余物溶解，将此乙醇溶液放凉，胆固醇即结晶析出，再用酸水解或用碱皂化或水洗胆固醇粗结晶，除去黏附的磷脂质等，在95%乙醇中重结晶，最后把结晶置于70～80℃干燥器中除去水分即可。
　　四、肝素
　　肝素又称肝素钠，是以羊、猪小肠黏膜为原料提取制成的药物，具有抗血凝、防止血栓、治疗冠心病等功效，近年大量出口、售价很高。肝素生产设备比较简单，技术易为掌握，成本较低。
　　1. 羊小肠黏膜提取肝素
　　原料：十二指肠和部分空肠，长约40厘米，清水漂洗去污物，去除外层脂肪，绞碎（最好冻结后绞）成糜状。由于肠中总固体量较小，且有肠皮和断节小肠，纹碎度至关重要，与提取率密切相关。
　　工艺流程：羊小肠黏膜→碱解→盐解→过滤→离子交换→洗涤→洗脱→沉淀→沉淀物→脱水→干燥→肝素粗制品。
　　①碱解、盐解。按羊小肠黏膜500千克计算，置于真空反应锅内，边搅拌边加食盐25千克，用30%氢氧化钠溶液将pH值调到9～9.5，升温到50～60℃，停止搅拌，保温1.5～2.0小时，再迅速升温到90～98℃，并间隔搅拌，保温15分钟。
　　②过滤。将上述提取液趁热过滤，弃去滤渣进行第二次提取，合并滤液并取样化验。
　　③离子交换。待滤液冷却到50℃时，调节pH值到8.5～9.0，按羊肠黏膜重量的7%加入D-254树脂，搅拌8～10小时。
　　④洗涤和洗脱。将以上交换液过滤，弃除滤液，用清水漂洗干净树脂，滤干，先用8%氯化钠液洗涤1次，后用7%氯化钠液洗涤3次，滤干后洗脱。第一次用23%～24%氯化钠液洗脱5小时，第二次和第三次各用23%～24%氯化钠液洗脱2小时。
　　⑤沉淀。将洗脱液缓慢加入1.2～1.5倍量的95%酒精，搅拌片刻，静置过滤，次日用虹吸法除去上清液，剩下的沉淀物用布氏漏斗抽干。
　　⑥脱水干燥。经抽干水的沉淀物用95%酒精和丙酮脱水，直到沉淀物干松为止。将干松的沉淀物置于真空干燥器内真空干燥5小时左右，即得到灰白色的粉末——肝素粗制品。
　　2. 猪小肠黏膜提取肝素
　　工艺流程：猪肠黏膜→提取→过滤→离子交换→洗涤→洗脱→酒精沉淀→肝素粗制品。
　　①提取。取新鲜肠黏膜投入反应锅内，加入3%氯化钠液，用30%氢氧化钠将pH值调到9.0，升温到50～55℃，保温2小时，再迅速升温到95℃，保温10分钟，然后冷却过滤。过滤用30目双层纱布。
　　②离子交换。待冷却到50℃时加入714型树脂（用量为2%），搅拌8小时后静置过夜。
　　③洗涤。次日虹吸除去上清液，收集树脂，水冲洗至洗液澄清、滤干，用2倍量的8%氯化钠液搅拌2小时、滤干，再用1倍量的8%氯化钠液搅拌2小时、滤干。
　　④洗脱。继续用2倍量的17%～18%氯化钠液搅拌洗脱8小时、滤干，再用1倍量17%～18%氯化钠液搅拌洗脱2小时、滤干。
　　⑤酒精沉淀。将滤液合并，加入等量的95%酒精沉淀、过滤，虹吸去上清液，收集沉淀，用丙酮脱水、干燥，即得肝素粗制品。
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