随着罗非鱼养殖规模的扩大、集约化程度的提高, 抗病力强 的罗非鱼也难逃疾病的威胁。近年来病害的时有暴发更是阻碍了罗非鱼健康养殖的可持续发展,如2009年在我国南方暴发的罗非鱼链球菌病就给罗非鱼养殖带来了巨大的损失。本文就日前罗非鱼疾病的病原学、流行病学、诊断技术和防治等方面的研究情况进行介绍,为广大基层水产工作者和养殖户在对罗非鱼疾病的防控上提供参考。
一、近年来罗非鱼的疾病概况
1.病害流行情况 罗非鱼以其生长快、适应性和抗病力强等优势备受养殖户推崇,然而在罗非鱼养殖的密集区,暴发性疾病时有发生。如2004~2005年嗜水气单胞菌肆虐,造成海南养殖的罗非鱼出现暴发性出血病:2009年5~9月广东、海南、广西等罗非鱼养殖区暴发链球菌病,发病率30%~70%,发病鱼死亡率高达60%~100%,给养殖户造成了巨大的经济损失。种种迹象表明,养殖的罗非鱼不再是抗病品种,病害成为威胁罗非鱼养殖健康发展的重要因素之一。病害一年四季均有发生,尤其是在7~9月的高温季节病害损失较大,危害各个阶段的罗非鱼,尤其是稚鱼至商品鱼阶段。
2.病害类型 危害罗非鱼健康的疾病以生物源性为主,集中在细菌性疾病上。其中,链球菌病是全球公认的罗非鱼最重要的病原体,每年在全球范围内造成大批的罗非鱼死亡,其主要危害范围从150克的稚鱼到1千克重的成鱼。柱状黄杆菌、运动性气单胞菌、假单胞菌、爱德华氏菌等也是罗非鱼鱼种阶段常见的病原体。此外,初春、深秋两季是寄生虫性疾病和真菌病的高发季节,尤其是越冬期间的罗非鱼易发生水霉病、指环虫病和车轮虫病。虹彩病毒病是目前罗非鱼病害中唯一确定的病毒性疾病,但在我国还未见关于罗非鱼病毒病的报道。立克次氏体是罗非鱼疾病的一个新的致病病原体,虽然目前仅在中美洲有报道,但其巨大的破坏性也应引起我们的重视。
二、罗非鱼常见病害防治
1.病毒病 罗非鱼作为暖水性鱼类,当养殖水温低于15℃时即处于休眠状态,此时机体代谢机能降至最低,不利于病毒的增殖,可能正是这一原因使国内外少有关于罗非鱼病毒病的报道。 目前,虹彩病毒病(Iridovirus disease)是罗非鱼有明确记录的唯一的病毒性疾病。该病的最早发现是在上世纪70年代,非洲东部湖泊中野生的罗非鱼暴发了由淋巴囊肿病毒引起的疾病。Walker等(1962)研究表明该病毒能在60天内引起莫桑比克罗非鱼100%的死亡,发病罗非鱼呈快速螺旋状游动。此后,Ariel等(1997)报道了由感染蛙虹彩病毒引起的罗非鱼旋转综合症(Spinning tilapia syndrome,STs),疾病死亡率达100%。1998年有报道指出加拿大从美国进口的罗非鱼稚鱼中检出蛙虹彩病毒。国内目前虽未见关于罗非鱼虹彩病毒病的病例报道,但我们应予警惕。
病原:虹彩病毒科(Iridovfrfdae)的淋巴囊肿病毒(lymphocystis disease virus,LCDV)和蛙虹彩病毒(Bohle iridovirus,BIV)。虹彩病毒科中的淋巴囊肿病毒能引起包括牙鲆、鲈鱼在内的几十种淡水和海水鱼类的疾病;而主要感染两栖类、鱼类、爬行类的蛙虹彩病毒被认为是罗非鱼虹彩病毒病的重要病原。病毒粒子为二十面体,其轮廓呈六角形,有囊膜。大量病毒颗粒堆积可呈晶格状排列,直径一般为120~300纳米。
流行情况:虹彩病毒危害范围从几克的苗种到几百克的成鱼,主要感染10克左右的罗非鱼鱼种;发病水温在20~28℃。当水温低于24℃时病鱼呈现出一个渐行性的死亡,没有明显的死亡高峰期,发病一个月内病鱼死亡率约20%。
症状:患病鱼时而在水体中呈螺旋状快速游动,时而停止在水底;时而呈45°悬挂在水面。病鱼表现为体色发黑、鳃丝苍白、眼球突出和腹水症状,内脏器官尤其是肝脏发白明显。尼罗罗非鱼感染该病毒后多个器官出现炎症反应,脾脏、肾脏和心脏出现最为严重的出血性坏死,继续发展形成坏疽。罗非鱼感染蛙虹彩病毒时,肾脏和肌肉是主要侵袭的组织;肾小管收缩,肾间质出血并伴有大量炎性细胞浸润;大多数肌肉出现灶性溶解。
诊断:对于虹彩病毒病确诊可以结合以下几点:①通过流行病学和临床症状进行初诊,如病毒病的发病水温较低,病鱼呈现吊水症状等;由于病毒感染会对机体产生免疫抑制,很快诱发其他条件致病菌的感染,所以单纯地观察临床症状不足以准确地判定疾病。②采集发病鱼的新鲜组织后通过免疫学方法和分子生物学方法进行鉴定十分必要。如PCR法、LAMP法。③有条件、有时间的情况下,可以对分离病毒细胞培养后,进行毒株鉴定确诊。
防治:一直以来病毒病的治疗在水产上都是一个难题,几乎没有有效的药物可用。因此对于病毒病而言,预防成为最重要的防控措施。病毒粒子除了可以通过水体横向传播外,也可以通过亲子代进行纵向传播。把控好苗种关、切断带毒鱼的引入可以有效预防罗非鱼的病毒病。目前国内外研究均显示疫苗免疫是预防虹彩病毒病最有效的方法。国外日本等国已有商品化的虹彩病毒细胞灭活疫苗,国内中山大学何建国研究组对虹彩病毒弱毒活疫苗的研究已完成实验室阶段。生产上一旦养殖鱼类发生病毒病,可以通过降低养殖密度、改善水体环境,使用聚维酮碘等药物消毒水体,拌料投喂板蓝根、大青叶、三黄(50%大黄、20%黄芪、30%黄柏)和维生素C等来控制疾病的恶化。此外,可以适当地辅以抗菌药物如氟哌酸或土霉素,连续投喂5~10天,可防止继发性细菌感染。
2.立克次氏体感染 立克次氏体是鱼类的重要病原之一,能引起虹鳟、银鲑、大西洋鲑、石斑鱼、罗非鱼等多种鱼类的高感染率和高死亡率。Chern和Chao(1992)从我国台湾省发病罗非鱼体内最先分离到一种类鱼立克次氏体的微生物(RLOs),该病原引起罗非鱼的平均死亡率在30%左右,高峰期死亡率达95%;1998年福建省漳州水口库区网箱养殖罗非鱼暴发立克次氏体感染,疾病在该地区广泛流行并引发大批鱼死亡。
病原:立克次氏体(rickettsia)是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,其分类介于细菌和病毒之间,具有类似细胞样的结构,有一层薄的细胞壁,含有 DNA和RNA两种核酸;立克次氏体的大小为(0.08微米× 0,3微米)-(0.3微米×0.7微米),革兰氏阴性,大多数是杆状,但也有球形或多形性的:多数是非运动性的,也有鞭毛型的。
流行情况:立克次氏体专性感染罗非鱼亲鱼和苗种;带毒亲鱼不会出现急性死亡,而带毒负由于抗应激能力差,在运输移池后,往往出现大批死亡。带毒亲鱼可通过垂直传播将病原传播给鱼种,使得苗种发病,发病水温在25~28℃;也有资料显示水温15℃时较30℃更容易发病死亡。此外,该病原还可在带毒鱼间水平传播。
症状:病鱼初期无症状,摄食亦正常,中后期大部分病鱼食欲下降,体形消瘦,体色变黑;有的体表鳞片脱落,皮肤糜烂,鳍基出血溃烂;少数眼球突出、出血,部分鱼伴有旋转等神经症状。剖解病鱼可见脾脏显著肿大。实质器官由于慢性炎症反应形成肉芽肿病变,大部分内脏如肝、肾、脾上可以观察到1~5毫米的分散状白色结节。
诊断:①通过接种易感细胞株,如大鳞大马哈鱼胚胎细胞系(Chinook salmon embryo cell lines, CHSE~214)、罗非鱼卵巢细胞系(Tilapia ovary cell lines,T02)等,17℃培养7~12天后透射电镜观察是否出现80%以上的细胞病变(CPE)可初诊。②免疫荧光、免疫组织化学方法、常规PCR技术、巢式PCR技术,以及荧光定量PCR技术均已被应用到鱼类立克次氏体的快速检测诊断上。
防治:①立克次氏体主要靠宿主交换或媒介物传播,也可通过垂直传播给予代,从非疫区引种、加强日常管理可以有效预防该病。②疫苗接种能有效地保护鱼体抵抗病原入侵;如Microtek国际公司研制的鲑鱼立克次氏体性败血症(SRS)重组亚单位疫苗已进行商业化生产,该疫苗对虹鳟鱼、银大马哈鱼和大西洋鲑活体试验的RPS值分别达100%、92%和85%,有效地控制了疾病的传播,说明立克次氏体疫苗防治该病是可行的。③立克次氏体样生物对大部分抗菌素敏感,因此早期可选用四环素类和氟苯尼考等内服治疗。但鱼类口服抗生素治疗立克次氏体病,很难达到理想的效果,原因可能是由于抗生素很难在宿主细胞内达到有效浓度,从而不能对细胞内寄生的立克次氏体产生抑制和杀灭作用。所以对于该病的防控更多的是从预防入手。
3.爱德华氏菌病(Edwardsiellosis)Badran(1993)报道了由迟缓爱德华氏菌(Edwardisellatarda)引起的罗非鱼爱德华氏菌病。迟缓爱德华氏菌无荚膜、无芽孢、有运动力、接触酶阳性、氧化酶阴性兼性厌氧,革兰氏染色呈阴性短杆状;菌体大小(0.5~1.0)微米×(1.0~3.0)微米,最适温度28~37℃,pH5.5~9.0。
该病流行于夏秋两季,是条件致病菌,罗非鱼属于易感鱼类。病鱼体色发黑,腹部膨胀,肛门发红,眼球突出或混浊发白,有的病鱼体表可见膨隆发炎的患部,尾鳍、臀鳍的末端和背鳍后端坏死发白:有的病鱼表现为体表、鳍条基部和下颌部的充血和出血,体表和肌肉出现破溃;肝脏苍白或发黄,有的肝脏可见白色小点,胆囊胆汁充盈,严重的发展为肠炎。
对于爱德华氏菌病的确诊可以结合以下几点:①从病鱼的病灶组织分离病原菌进行培养,接种特殊培养基,如EIM(Edwardsiella Icatluri selective medium),形成亮绿色的菌落来诊断;②分离的细菌通过间接ELISA方法鉴定或对溶血素基因进行PCR扩增鉴定;⑧采集病鱼肝脏和肾脏进行组织PCR扩增检测确诊。
疾病治疗手段:①水温升高和环境应激原的增多是导致带菌鱼死亡率增高的原因之一,因此加速水流、降低水温、改善水质、减少应激原有利于疾病的有效控制;②药物治疗采用含氯消毒剂,如漂白粉浓度为1~1.2克/立方米,或强氯精0.3~0.6克/立方米全池泼洒;四环素,每天每千克鱼用药50~70毫克,制成药饵,连续投喂7~10天;或者氟哌酸,每天每千克鱼用药100毫克,制成药饵,连续投喂3~5天。
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