诊断高寒牧区绵羊衣原体病,需借助流行病学、临床症状、实验室检验以及病理剖检等多种措施。实践性的防治中,通过对饲养的管理、隔离病羊、严格消毒、紧急免疫等多种综合性方法,以此才可控制疫情的进展。现就高寒牧区绵羊衣原体病的诊断与防治进行简单分析。
1、临床症状
观察生病母羊,在其怀孕的最后1月内出现流产的现象。病情发展的最初阶段,母羊表现出精神沉郁,食欲减退,呼吸困难,腹痛以及咳嗽等。检查其体温,发现升高至40~41℃。一般情况下,母羊在1~2天内会出现流产、产死胎、产弱羔的现象。如母羊出现流产,就会发现其胎衣长时间滞留于体内,恶露维持很长时间,有的时候还会达到数十天。研究分析已经发病的绵羊,发现有的主要是出现继发细菌感染,导致出现化脓性子宫内膜炎。发病的羔羊在初期阶段,体温会上升至41~42℃。与患病前相比,其食欲明显减退。日常生活出现跛行、侧卧、弓背以及离群的现象。前肢与后肢的腕关节、跗关节出现不同程度的炎症。眼角膜水肿、充血,并有大量的眼泪流出。角膜穿孔、糜烂、混浊以及溃疡等症状表现出不同的严重性。直至病情发展的后期阶段,生病绵羊不能站立,随后出现倒地抽搐、死亡。
2、病理解剖
为进一步了解病情发展状况,需进行病理解剖分析。解剖中发现,流产母羊的胎膜有水肿现象,子叶表现出黑红、黏土颜色,并且胎膜周围有棕红色的渗出物。同时观察到胸、颈部皮下有黄色胶样浸润[1]。将肺脏进行解剖,发现心叶、尖叶、中间叶、隔叶有纤维素性质的血性炎症,表现出肉样,皮肤表面发现出血点。胸腔和腹腔内发现有大量的淡黄色甚至红黄色液体。心脏结构比较弛缓,心肌表现出煮肉样,心冠脂肪呈胶样出现水肿。肝脏呈紫褐色,且有轻度的萎缩状,肝脏边缘表现出锯齿状,且比较柔软,心脏包膜可发现出血点。剥离肾脏包膜的时候,较为困难,且有纤维素附着。流产的胎儿表现出水肿,皮肤和黏膜上有细小的出血点。肝充血、肿胀,腹腔积液,血管充血,气管黏膜有散在性出血点。经病理学检查,胎儿肝、肾、心、肺、骨骼肌的血管周围组织形成网状内皮细胞增生性病灶。。
3、实验室检查
在进行实验室检查的过程中,将已经流产母羊的胎衣和死亡羔羊的脾、肝、肺等组织液进行涂片,并使用革兰氏染色镜检,但此项检查并未发现任何的细菌。随后进行姬姆萨染色镜检,发现多核巨噬细胞浆内有大量的大小不等紫色或蓝色疑似为衣原体和原体;将检查的病料组织置于鲜血琼脂、SS琼脂、胰蛋白胨琼脂以及普通的肉汤培养基中,于37℃下培养72 h,但并未发现沙门氏菌、布鲁氏菌与胎儿弧菌致病菌。
在无菌环境下采取相应的病料组织,且稀释研磨包含链霉素与卡那霉素500万IU/mL的生理盐水进行稀释。将溶液置于4℃的环境下保持低速离心操作4h,将上清液吸取,连续接种7日龄的鸡胚0.4 mL,于37℃进行培养,每天观察数次。就可发现鸡胚于l周内相继死亡,且胚体出现水肿、增厚,并存在出血点。卵黄膜血管充血,非常容易剥离。将卵黄囊膜进行抹片,经姬姆萨染色镜检,可发现大量的衣原体颗粒分散在不同的组织部位。
4、防治措施
一旦确认病情,养殖户应加强饲养管理,同时还应对圈舍、用具以及草场进行消毒处理。与此同时,还需封锁养殖区域,将病羊及时的进行隔离,加强护理管理,采用四环素抗生素与庆大霉素予以治疗。如果有病死的羊畜、流产胎衣,还需进行进行特殊化处理,如焚烧无害化处理。针对同群但尚未被感染的羊群,就应使用衣原体弱毒苗接种,同时将0. 05%的四环素拌入饲料中进行喂养,加强预防处理。在日常养殖中,养殖户应做好检疫工作,杜绝外源性病菌的侵入。养殖户如果接触病羊或死羊,应做好自身预防化处理。唯有采取此类措施,才能够控制疫情,减少病死羊数量。衣原体可在不同种类的动物之间传播,且还可人畜共患。这种病菌在人体内可经呼吸道途径进行感染,且伴随干咳、间质性肺炎、发热、沙眼与尿道炎,感染严重的患羊还有可能引起死亡。因而,在综合防治高寒牧区绵羊衣原体的时候,养殖户还应做好自身防护和保健,做好养殖区的卫生工作‘2]。
在后续的动物疫情控制中,高度重视此种疫情,加强监测。因地制宜建立科学化的免疫程序,对羊群进行免疫接种。并且还应做好检疫工作,落实消毒处理工作,尽可能预防疫情的发生、扩散与蔓延。另外,在市场流通、引种频繁与检疫把关等多种措施。同时还应实行粗放型管理,加强清洁卫生,强化消毒灭菌意识。
一、绵羊衣原体病病原
流产嗜衣原体属于衣原体目、衣原体科、衣原体属。一般情况下流产嗜衣原体呈球形或卵圆形,一般为02-1.0μm大小,革兰氏染色阴性。衣原体不能在一般培养基上繁殖,常在鸡胚和组织培养(如羚羊胚胎肾细胞系)中能够复制和增殖。衣原体严格在真核细胞内寄生,具有核糖体和细胞壁,有独特的发育周期,对多种抗生素敏感。一般情况下0.1%甲醛、0.5%石炭酸、70`75%酒精、3%火碱均能灭活衣原体。同时衣原体对一些广谱抗生素如四环素、土霉素、红霉素等敏感,而对链霉素有抵抗力。
二、流行病学
许多野生动物和禽类是衣原体的自然贮主。该病的主要传染源为患病动物和带菌动物。衣原体可通过患病动物的泪液、乳汁、尿液、粪便、鼻分泌物以及流产的胎衣、胎儿、羊水等排出病原体,污染水源、饲料及环境。本病主要经呼吸道、消化道、损伤的皮肤和黏膜感染;也可通过本交感染;本病一般呈地方性流行。一些应激因素如密集饲养、长途运输、营养缺乏或迁徒、营养不良、寄生虫等可促进本病的发生和流行。本病的发生与流行没有明显的季节性,一年四季都可发生,春、冬季节较多见,秋季次之,遇降雪、降温、寒流等气候突变时流产率显著升高。母羊怀孕前、中、后期都会发生流产,但以怀孕中期和怀孕后期最多。一般情况下后备母羊和1~1.5岁的母羊受孕感染后比成年母羊发生流产的多。羊衣原体性流产还与膘情、营养状况和饲养管理有关,草场饲草茂盛、体况好及饲养管理好的羊群流产发生率较少。绵羊的抗体阳性检出率显著高于山羊抗体阳性检出率,这可能与绵羊、山羊对本病的感受性不同相关,但是山羊衣原体流产的报道多于绵羊。
三、临床症状
临诊上羊常表现流产型、关节炎型和眼结膜炎型:流产型:怀孕母羊的流产多发生怀孕4个月之后,感染母羊流产、死产和产出弱羔,感染母畜往往胎衣不下或胎衣滞留,阴户红肿、排流产分泌物可达数日之久。发生过流产的母羊一般不再流产。当母羊怀孕时造成流产或产下的虚弱的羔羊,羔羊一般不会存活。关节炎型:羔羊多发性关节炎多发生于肥育羔羊和哺乳羔羊,尤以3~5月龄羔羊多见。发病初期病羔体温升高,可以达到41-42℃,精神萎靡、食欲降低,离群,肌肉僵硬、疼痛,因而造成行动障碍,一肢或四肢跛行,肢关节肿胀疼痛,体重减轻,病程2-4周。羔羊痊愈后对再次感染具有一定程度的免疫力,死亡低,呈地方流行性。
结膜炎型:绵羊特别是羔羊容易发生结膜炎性衣原体。病羊单眼或双眼均可发生,病眼流泪,结膜充血、水肿,角膜混浊,进一步发展甚至造成糜烂、溃疡或穿孔,经过治疗后一般经2-4d开始愈合。
四、剖检变化
流产型:流产动物胎膜水肿、增厚;胎盘上形成血管炎和血管栓,有的形成坏死性胎盘炎,胎盘子叶出血、坏死,流产胎儿全身苍白,贫血,皮下水肿。关节炎型:患病动物的关节囊扩张,发生纤维素性滑膜炎。结膜炎型:临床病变和临床症状基本相同,组织学变化限于结膜囊和角膜,疾病早期,结膜上皮细胞的胞浆中先出现衣原体的繁殖型初体,然后可见感染型原生小体。
五、实验室诊断
目前衣原体的主要诊断方法有病毒分离和鉴定、间接血凝试验(IHA)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光试验、PCR技术和荧光定量PCR检测技术等。
(1) 病原分离与鉴定病料采集:采集血液、流产胎儿及流产分泌物、关节滑液、脑脊髓组织等病料。将病料悬液0.2ml接种于5-胚龄的鸡胚卵黄囊内,感染鸡胚常于接种后5~12d死亡,表现为胚胎或卵黄囊表现充血、出血。取卵黄囊抹片镜检,可发现大量原生小体。
(2)血清学试验:间接血凝试验、补体结合试验、ELISA、中和试验、免疫荧光试验等均可用于本病的诊断。
(3)衣原体抗体胶体金试纸条法:2005年军事医学科学院与北京市兽医生物药品厂联合申报的衣原体胶体金检测试纸条获得农业部颁发的新兽药证书,该检测试剂主要用于衣原体血清抗体的检测;由于中国尚无衣原体疫苗的规模化使用,检验抗体阳性的畜群,都可以界定为发生过感染或隐性感染。
(4)分子生物学检测:PCR是动物衣原体病诊断的实验室技术之一,目前用于衣原体PCR检测的基因主要是衣原体外膜蛋白基因和16~23S rRNA基因。此外,荧光定量PCR(real-time PCR)、多重荧光定量PCR等方法也在衣原体诊断中得到了一定程度的应用。
六、鉴别诊断
本病的主要临床症状(流产)与布氏杆菌病、弯曲菌病等疾病相似,临床上不能区分的可以借助实验室方法进行鉴别诊断。
七、防控
(1)加强生物安全、饲养管理、卫生管理,做好驱虫工作,隔离饲养、消除各种诱发因素,杜绝病原体传入和扩散。
(2)疫苗防疫:血清学阳性的饲养场,要开始使用羊衣原体基因工程亚单位疫苗,后备母羊可以在配种前进行免疫注射,配种后三个月内加强免疫,以后每次配种后进行一次正常免疫;种公羊每年两次进行免疫;繁育母羊在每次配种后三月内进行免疫注射。
(3)发生衣原体病流产时,要对流产母畜及其所产羔羊及时隔离、治疗。流产胎盘及排出物必须进行无害化处理。污染的圈舍、用具、场地、垫草、环境等可以用2%火碱溶液、2%来苏儿溶液或火焰喷射等进行彻底消毒。)治疗时选用广谱抗生素如强力霉素、罗红霉素、阿奇霉素、四环素和红霉素等,按照药物说明书进行治疗即可
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