影响羊胚胎移植受胎率的主要因素

袁东波1 尹念春2 陈家树3

1.四川省南充市动物疫病预防控制中心，四川南充637000；

2.四川省遂宁市动物疫病预防控制中心，四川遂宁629000；

3.四川省南充市农牧局，四川南充637000

收稿日期：2014-07-10

袁东波，男，1980年生，预防兽医学硕士。

近年来，为大力发展养羊产业，丰富我国优质羊品种资源，减少从国外直接引种的风险，羊胚胎移植技术广泛应用于养羊生产实践，在羊纯种快速扩繁中取得了良好的效果，然而羊胚胎移植受胎率一直是制约羊纯种快速扩繁的重要因素，受到大家的关注。本文针对影响羊胚胎移植受胎率的主要因素进行了分析。

1 供卵及胚胎质量

供卵及胚胎质量对移植能否成功关系密切。即使密切同期化的供受体，如果移植了异常胚胎，如细胞卵裂不规则、细胞固缩、细胞发育迟缓等，移植后也会失败。因此，在胚胎移植过程中，对胚胎质量的鉴定十分重要。

1.1 供体羊的年龄不同，卵的质量不同

成年母羊排卵移植后的成功率大于育成羊。在体外培养条件下，成年母羊的胚胎比初情期前幼龄母羊（5~7 月龄）的胚胎正常发育的比例大，发育快，有较强的生命力。

1.2 成年母羊处理前的激素内环境

在性周期的第16 天注射孕马血清促性腺激素（PMSG）后获得的卵，有90%以上为受精卵，而在性周期的第10 天注射PMSG 后获得的卵，其受精卵则低于90%。所以成年母羊处理前的激素内环境决定排卵时的卵泡刺激发生时间。当卵泡受刺激时，孕酮水平及其存在的时间长短，可能是决定卵质量的重要因素。

1.3 诱发超数排卵时的卵巢反应

超数排卵后卵受精率低，则胚胎采集率和移植妊娠率也低。受精率低经常发生在某一头供体所排的卵中，甚至出现所有卵都不受精的现象。卵子不受精的原因，可能由于超数排卵时引起母畜内分泌紊乱，排出不成熟的卵子。就胚胎质量而言，每个卵巢排8~10个卵为合适。

1.4 哺乳期泌乳母羊排卵数较少

带羔哺乳母羊的胚胎比干乳期母羊胚胎的生命力低，把这两种母羊的胚胎相互交换移植后结果表明，不育的原因出现在供体。

1.5 不同个体对激素的反应差异

在相同的饲养管理条件下，当注射同等剂量的促性腺激素时，有的个体超排效果很好，排卵很多；有的起不到超数排卵的效果，只排1 个卵；有的没有发情表现，甚至不排卵。从胚胎培养实验表明，不同个体的卵，虽处于相同的发育阶段，且在同样的培养条件下，但卵的活力差异大。经验认为一只供体经过超数排卵处理后，当采集到较多的受精卵，且卵的发育阶段较为一致时，把这些胚胎移植后，常可获得较高的受胎率，对这样的母羊可重复采卵和移植。

1.6 季节对超排效果和卵质量的影响

实验表明秋末冬初效果最佳，早春次之（www.nczfj.com），夏季最差。

2 胚胎发育阶段与移植部位

2.1 受体的妊娠率随移植胚胎日龄的增加而相应提高

3 日龄胚胎的移植妊娠率最低，5 日龄以后的胚胎对逆境（如温度的骤变）的耐受力较好。有研究表明，实际胚龄（或者说是子宫环境）4 日龄胚胎移植到受体发情3 天的子宫中比3 日龄胚胎移植到发情3 天的子宫中有更高的胚胎存活率。

2.2 母羊发情的生殖道内部形态和生理机能变化

羊的早期胚胎在输卵管内运行滞留的时间约72 h左右，所以72 h前采到的早期胚胎应移入输卵管内；超过72 h，胚胎进入子宫，由子宫采到的早期胚胎应移入子宫内。有实验指出为了提高输卵管移植胚胎的生存率，满足在发情后72 h或更晚时间采胚、受体发情开始时间与供体相差不超过早晚12 h、移植8细胞胚等条件，大约75%的受体能够成功妊娠。

2.3 胚胎移植的部位

在胚胎移植中，要根据移入胚胎的日龄、原来所处的部位来决定移植的部位。一般移植部位往往和采集胚胎的部位相对应。即从输卵管采集的胚胎移植到输卵管，从子宫角采集的胚胎移植到子宫角，才能获得较好的移植结果。胚胎移植到输卵管时，移植到输卵管深部受胎率高。胚胎移植到子宫角时，5~6 日龄的胚胎移植到输卵管一侧子宫角接合部附近（即子宫角项部）比子宫角中部有较高的存活率，以后随日龄的增加，胚胎移植的部位可以相应移向子宫角基部。胚胎移植到子宫，达到较好受胎率的同步差范围较输卵管宽。移植子宫的胚胎，一般是桑椹胚和囊胚。在母羊发情后的第7 天，孕酮在卵巢静脉内的浓度达到最大浓度，并相对恒定地维持到第15 天，因此，在母羊发情稍后时期，供体与受体将可能有一段幅度较大的同步时间，移植成功率较大。

3 胚胎移植数量

移植时胚胎的数量对受胎率有很大的影响。一般双胚移植比单胚移植可以获得更高的受胎率。

4 胚胎的体外保存

鲜胚移植时，胚胎从供体取出后到移植给受体之前，在体外有短暂停留和保存的时间，这期间胚胎及其保存液应放在密闭的容器内，防止保存液的蒸发和污染，维持保存液与胚胎之间的渗透压和无菌，并在适宜温度条件下保存胚胎。无论保存时间长短，要求保存后再移植的胚胎有继续发育的能力。在体外培养和保存过程中，pH值的变化对胚胎的生存有较大害处。移植时胚胎在体外的温度迅速下降，移植成功率随之下降。受体在25~30 ℃环境中，移植的成功率较高，而在5~15 ℃环境中，移植的成功率低。

冻胚移植时，胚胎从超低温环境（如液氮罐）中取出后要迅速放到37 ℃（经验表明解冻温度调至38~40 ℃时有较好缓冲温度变化的作用）环境中解冻，以迅速越过低温打击区，移植后的成功率才高。

参考文献

[1] 桑润滋. 动物繁殖生物技术[M].2 版. 北京：中国农业出版社，2010.6.

[2] NY/T 826-2004，中华人民共和国农业行业标准[S].绵羊胚胎移植核技术规程.

[3] 王永军，田秀娥，马保华，等.布尔山羊不同季节超排效果比较研究[J].畜牧兽医杂志，2003，22（6）：7-8.

[4] 张金龙，张效生，崔茂盛，等.胚胎因素对肉羊胚胎移植效果的影响[J].中国草食动物科学，2013，33（5）：73-74.

[5] 海丽且木，陈静波，董红，等.浅谈改进羊胚胎移植技术提高受胎率的措施[J].草食家畜，2011（4）：39-40.

[6] 郭尚军.影响肉羊胚胎移植妊娠率因素的探讨[J].黑龙江动物繁殖，2012，20（6）：36-43.