獭兔大肠杆菌与肠型球虫混合感染的诊治方法

2002年5月，山东省莱州市朱由镇一獭兔饲养户，引进160只3月龄獭兔，发生以排胶冻样和水样粪便、腹部发黑、结膜苍白、消瘦和痉挛死亡为特征的疾病，我们根据观场调查、临床诊断、剖解、实验室诊断，确诊为大肠杆菌与球虫混合感染，情况如下：

1 现场调查

该兔场由于引种前准备不充分，兔饲养在三层水泥制的老兔舍，由于底板缝隙小，而且缝隙仅中央部分有，大部分兔粪便都堆积在兔窝角落，每窝饲养2～3只，兔体被毛污浊，地面潮湿，兔舍窗小，通风不好，整个兔舍粪尿味刺鼻。据畜主讲，刚引进来10天内，兔群并无异常，正准备迁到新建兔舍时有20只兔死亡，根据经验用了一些药物，但病情继续发展。

2 临床症状

病兔体温正常或低于正常体温，精神沉郁，被毛粗乱，脱水，消瘦，贫血，腹部膨胀，剧烈腹泻，肛门和后肢的被毛附着大量明胶样和两头尖的粪污。病兔四肢发冷，经常磨牙，流涎。病程长短不一，有的无症状很快死亡；有的突然侧身倒地，肌肉痉挛，头后仰，发出惨叫，迅速死亡；病程稍长的脱水、消瘦、贫血，最后衰竭死亡。

3 剖检病变

对病死的13只兔进行了剖检，发现大部分肠黏膜发炎，有的有出血点或淡黄色的结节。胃膨胀，胃黏膜发炎，充满多量液体和气体；十二指肠充满染有胆汁的黏液样的液体；空肠扩张，内有半透明胶水样液体；回肠内容物呈现黏胶样，粪球细长，两头尖，外面包有黏稠液或灰白色胶冻样分泌物；结肠扩张，有透明胶样黏液；直肠有大量的胶冻样液体，黏膜与浆膜充血，有出血斑点；大部分病例盲肠尤其是蚓突有大量淡黄色的结节。部分病例胆囊胀大，肝脏、心脏有小点坏死灶。膀胱积有黄色混浊尿液，膀胱黏膜脱落。

4 实验室诊断

4.1 涂片镜检

用病死兔肝脏、心血、结肠内容物，分别涂片，革兰氏染色，镜检，发现有单个或呈短链状排列、两端钝圆的短杆菌，无荚膜和芽孢，有鞭毛，有运动性，革兰氏阴性。

剪开盲肠，在结节性病灶处刮取少量肠黏膜，置于载玻片上，滴加1滴甘油饱和盐水，调和均匀，加上盖玻片，进行镜检，发现有许多艾美球虫卵囊存在。

4.2 分离培养

无菌粘取或钩取新鲜病死兔的肝脏、心血、结肠内容物，用划线法接种于普通琼脂平板培养基上，37℃恒温箱中培养24小时，挑选单个圆形、微隆起、湿润半透明的灰白色的小菌落进行纯培养(www.nczfJ.com/)。将挑选的菌落分别接种到普通琼脂培养基和肉汤培养基上，37℃恒温箱中再培养24小时，得到纯培养物。普通琼脂培养基上长出圆形、微隆起、湿润半透明的灰白色的菌落；肉汤培养基生长丰盛，肉汤变得异常混浊并形成淡灰色沉淀。将得到的纯培养物抹片、革兰氏染色、镜检，其细菌的形态大小与镜检结果相同。

生化试验：用得到的细菌纯培养物做生化试验，结果是能产生靛基质，不分解尿素，不产生硫化氢，不液化明胶，M.R.试验阳性，V-P阴性。能发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇，并能产酸、产气。

动物实验：选健康无病的实验用小豚鼠12只，分甲、乙两组，甲组为实验组，乙组为对照组。甲组用培养24 小时的肉汤培养物0.3mL/只腹腔注射；对照组用无菌生理盐水0.3mL/只腹腔注射，然后进行观察。两天后实验组开始有发病表现，第3天死亡4只，最后一只第5天死亡。对照组无发病。取病死小豚鼠的肝脏、心血、腹水分别涂片，革兰氏染色后镜检，镜检结果与上述检验相同。

根据以上各种检验结果，可确定獭兔已被大肠杆菌感染。由于当时条件有限，不能鉴定大肠杆菌的血清型。

4.3 粪便球虫卵囊的检查

涂片镜检：在载玻片上先滴1滴50%的甘油水溶液，放入火柴头大小的新鲜病兔粪便，用竹签加以涂抹，去掉硬固物，盖上盖玻片，显微镜下镜检。共做抹片5张，其中3张视野中有多个艾美耳球虫卵囊存在。为确诊用漂浮法检查。

粪便漂浮法虫卵检验：取多个病兔的新鲜粪便共2Og，放在玻璃杯中，用玻璃棒将兔粪捣烂，加入100mL饱和生理盐水，再将此粪液用双层纱布过滤到另一个烧杯中，滤液静置30分钟左右，如果有球虫卵囊就会浮到液面上来。用 1Omm 左右的小铁丝圈，平着接触液面，沾取一层水膜，抖在载玻片上，盖上盖玻片，显微镜下观察，发现有大量的艾美耳球虫卵囊存在。

实验结果表明，獭兔感染了大肠杆菌，同时也被艾美球虫所感染。

4.4 药敏试验

选用12种抗菌药物（青霉素、链霉素、庆大霉素、丁胺卡那霉素、环丙沙星、恩诺沙星、红霉素、强力霉素、诺氟沙星、痢特灵、土霉素、氯霉素）， 用常规纸片法对分离的大肠杆菌进行药敏试验，所用药敏试纸为本站实验室自备。判定标准以抑菌圈大小而定，直径小于1Omm的为耐药，直径10-15mm 的为中度敏感，直径15mm以上的为高度敏感。结果对环丙沙星、强力霉素、庆大霉素高度敏感；对红霉素、氯霉素、丁胺卡那霉素、恩诺沙星中度敏感；对其他药物都表现一定程度的耐药性。

5 治疗

隔离消毒：确诊后迅速将病兔进行隔离，并将环境、笼舍彻底清扫，用5%热氢氧化钠水喷洒消毒，每天1次，连续一周；用具清洗后，用0.01%高锰酸钾消毒，并放在阳光下照射。

预防性用药：对健康獭兔全部采用药物预防，饮水中加入0.5%盐酸环丙沙星，每天两次，连用5天。同时饲料中加入磺胺二甲嘧啶以预防球虫的感染。

大肠杆菌治疗：根据药敏试验，选用硫酸庆大霉素每只2万单位肌肉注射，每天两次，连用5天。体质较差的配合静脉注射5%葡萄糖生理盐水20～50mL。

球虫治疗：采用中西结合方法，提高治疗效果。用磺胺二甲嘧啶按每天每千克体重0.2mg，分两次内服，首次剂量加倍，连用5天。中药用仙鹤草根150g、黄柏5Og、大黄 3Og、白头翁3Og、黄芩2Og、甘草2Og，共研细末，每只兔每天3g拌入饲料内服，连用5天。经过一周的治疗，除病重的12只死亡之外，其他的均痊愈。

6 小结

（1）兔的大肠杆菌病发生原因一般是由于饲养条件和气候环境条件的变化而导致植物神经系统的扰乱，肠道中主要的革兰氏阳性菌群被革兰氏阴性细菌群 （主要是大肠杆菌）所代替，发生剧烈腹泻甚至死亡。当气温在10℃以上时，饲养管理差，1～4月龄的兔球虫病感染严重。以肠型为主，如措施不当，死亡率可达100%。

（2）药敏试验结果表明，大肠杆菌对部分抗生素有一定的耐药性。要选择敏感药物使用，避免浪费药物和延误防治时机。用药时最好几种药物交替使用，或使用中药治疗会收到满意的效果。

（3）预防本病主要从加强饲养管理入手，注意舍内通风，保持卫生干燥，定期消毒，喂给全价配合饲料。发病时对用具、饲料、饮水进行消毒。必要时采用药物预防，做到早发现、早处理。