雏鸡大肠杆菌病的诊治 雏鸡大肠杆菌的实验室诊断

最近几个月，随着鸡苗价格的攀升，许多孵化场为了追求效益，使鸡苗质量下降，导致雏鸡早期疾病多发，饲养前期弱雏淘汰率平均高达5％，给养殖户造成了不小的损失。特别是早期的大肠杆菌和沙门氏菌病，治疗效果并不理想。下面一起具体来了解一下：雏鸡大肠杆菌病的诊治 雏鸡大肠杆菌的实验室诊断。

雏鸡大肠杆菌的实验室诊断

1、材料与方法

1.1　材料

1.1.1　病料来源

病料来源为绥化市某县市中随机选出的三个鸡场中疑似大肠杆菌感染的　7日龄鸡群中分别各取出　10只进行临床诊断和实验室诊断。

1.1.2　培养基和试剂

主要培养基和试剂有麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、革兰染液，普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、三糖铁琼脂、药敏片、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、乳糖、蔗糖、枸橼酸盐及各类生化反应试剂、大肠埃希菌O型抗血清。

1.1.3　仪器

主要仪器有显微镜、试管、培养皿、吸管等。

1.2　进行雏鸡大肠杆菌实验的方法

分别对三个鸡舍的鸡群总数、发病数和死亡数作出统计。无菌采集病死鸡的心、肝、脾、肺、肾等组织，将病料触片和血液涂片，分别进行革兰染色和碱性美蓝染色、镜检。对A、B、C三个样病例进行细菌分离培养和血清型鉴定。从三个样中随机挑取两个总共组成6个　(a、b、c、d、e、f)紫黑色带有金属光泽的菌落接种到斜面培养基上，37℃恒温培养18~24h。观察细菌生长及菌落特征。

1.2.1　动物回归试验

将分离纯培养的　6个病原菌菌液颈部皮下接种　30　只　7　日龄雏鸡，每只　0.2mL(约2×108cfu)。并设10只为对照组，每只颈部皮下注射0.2mL灭菌肉汤。隔离饲养，观察1　星期。

1.2.2　药敏试验

将斜面培养基中增菌纯培养的菌株培养液均匀涂布于普通琼脂培养基表面，37℃干燥8min。然后用灭菌镊子取　10种抗生素药物纸片，将其分别对称地贴在培养基表面，每个平皿贴4种，37℃恒温培养18~20h后观察结果。使用的　10种药物为呋喃妥因、复方新诺明、庆大霉素、链霉素、青霉素、丙氟哌酸、头孢他啶、利福平、磺胺嘧啶、新生霉素。还做了平板凝集试验和生化试验。

2.　结果与分析

2..1　镜检、血清型鉴定和生化试验结果

病料涂片染色与病料接种培养后染色镜检，均检测到革兰阴性短杆菌。选择攻毒试验中对鸡呈现高致病力的菌株　a、b、c、d、e与禽大肠杆菌　O型单因子血清分别进行平板凝集试验，三个样A、B、C的血清型鉴定鉴定结果都包含O1、O2、O78。A、B、C三个群体总共30只病例中，有　16只分离株是可以定型的，其中以　O1、O2、O78为主，这三种血清型在种类上占总量的　53.3%(16/30)因此，可以认为　O78、O1、O2　可能是绥化地区的优势血清型。对分离的病原菌进行生化试验，均能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇及蔗糖，产酸产气，初步判断为大肠杆菌。

2..2　动物回归试验结果及分析

采用相同菌株攻毒，鸡只死亡数量具体见表1。

3　讨论

A、B、C　三家鸡场都是同一时期引进的鸡苗，出自同一鸡苗生产公司，对三家的鸡舍环境卫生以及饲养管理条件进行考察和比较来看，都存在通风不良的情况，且在对鸡舍加温时都采用了火炉方式，放鸡苗时从管理人员那里得知鸡舍内存在较重的煤气；鸡群发病期间末进行对症治疗，仅凭借经验采用超高浓度的药物饲喂雏鸡。因此，三个鸡场的发病情况和死亡率(分别是6.0%、5.2%与5.3%）情况基一致。

通过药敏试验可得出：可以采用对病原菌有高敏感性的抗生素对发病鸡群进行治疗；大肠杆菌的高敏感药物减少，多为中低敏药物并且产生耐药菌株。这可能是平时饲养管理时，多用滥用抗生素和病情长时间不能得到控制从而使病原菌不断的演化，对抗生素和一些药物产生耐药性。

从16株定型菌株的鉴定结果可以看出，O1、O2、O78等菌株出现的机率相对较高，且为优势血清群，这与国内、外称O1、O2、O35、O78为禽常见的致病性大肠杆菌血清型的结论一致。

本次针对三个养殖鸡舍中雏鸡大肠杆菌病的发病情况和饲养管理情况来看，一方面最主要原因可能是种蛋受到大肠杆菌的感染，另一方面加上转移雏鸡时鸡舍的环境温度和空气净化度控制不得当两方面的原因导致雏鸡大批发病死亡；并且在发病期间，相关养殖和技术人员并不清楚病因就仅凭借经验，抗生素严重超标以及滥用抗生素，使得雏鸡继发中毒，从而造成更严重的死亡；并使得大肠杆菌不断进化出更为耐药的强毒株，通过药敏试验可以清晰的看到分离菌株已经对几种药物产生抗性，选择高敏感的药物，用药2天后雏鸡发病情况得到控制，用药1星期后，病鸡基本康复；这使得我们今后在用药方面应该注意药物的耐药性问题以及对药物的选择性问题上具有指导意义。

雏鸡大肠杆菌病的诊治

1．流行病学调查 

该场从外地某孵化场购入雏鸡12000只，网上育雏。1日龄接种马立克氏病疫苗，7日龄接种鸡新城疫Ⅰ系弱毒疫苗。育雏舍用百毒杀消毒，饲喂自配混合饲料，并在饲料中拌入0.02%呋喃唑酮，0.1%高锰酸钾饮水。10日龄时，雏鸡开始发病，并出现死亡，至15日龄时，共发病4230只，死亡1458只，发病率为32.25 %，死亡率为12.15%。

2．临床症状 

病雏鸡精神萎靡，食欲下降，饮欲增加，翅膀下垂，呆立，不愿走动，闭目昏睡，有的尖叫不安，卧地不起。排灰白色水样便，泄殖腔污秽，沾满粪便，有的泄殖腔红肿外翻。有的死于脐炎。少数病雏鸡还出现转圈、扭颈等神经症状，最后衰竭而死。

3．病理变化 

剖检病鸡30只，多数鸡营养不良，消瘦。腹腔中积有半透明黄色液体。心包膜混浊增厚，心包积液增多。肝稍肿质脆，并有灰白色或黄白色坏死灶。肺淤血水肿，气囊混浊。肠管内充满气体，肠上皮脱落，粘膜呈条片状出血，肠内容物呈灰白色或黄白色水样粘液，有的肠管与腹膜粘连在一起。卵黄膜薄而易碎，卵黄呈干酪样或变为黄棕色水样的残留卵黄。

4．实验室检验 

4.1 涂片镜检 

取病死雏鸡肝、心血、脾、肾直接涂片，革兰氏染色，镜检见两端钝圆、单个或成对排列的阴性短杆菌。

4.2 细菌培养 

上述病料分别划线接种于血液琼脂平板和麦康凯平板，370C培养24h。血液琼脂平板生长出圆形、隆起、光滑、湿润、灰白色菌落，直径约2.5~3.0mm；麦康凯平板，生长出圆形、光滑、隆起、大小均一的红色菌落（中央颜色稍深）。

4.3 生化特性 

利用分离培养菌落作生化试验，结果该菌发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、产酸产气，不发酵蔗糖，不产生H2S，不分解尿素，不液化明胶，吲哚试验和M.R.试验均为阳性，V.P.试验阴性。

4.4 血清型鉴定 

用0.5ml生理盐水将上述分离到的2例细菌纯培养物分别洗下，各置小试管内经水浴煮沸2h冷却为待检菌O抗原，按定性凝集试验法，以标准大肠杆菌O群抗血清（中监所出品）同待检菌O抗原作因子血清玻片凝集试验，结果2株大肠杆菌均为致病性O78血清型。

4.5 动物试验 

将用灭菌生理盐水轻洗下的麦康凯平板培养物1：10稀释，腹腔接种于5只 健康小白鼠，0.2ml/只，结果在18~36h内全部死亡。取死亡小白鼠组织触片染色镜检和划线培养，分离到与接种菌完全一致的病原菌。

4.6 药敏试验 

用上海生化试剂厂出品药敏片，按常规纸片法进行药敏试验，结果该菌对庆大霉素、氯霉素、链霉素高敏；红霉素、四环素、卡那霉素中敏；痢特灵、先锋霉素5号、氨苄青霉素、青霉素G钠低敏。

5．防治措施 

5.1 将病雏鸡隔离饲养，加强雏鸡舍的通风、消毒，每日定时清除粪便，保持雏鸡舍的干燥和清洁。

5.2 用氯霉素按0.08%混于饲料中，连喂7d,并用庆大霉素按3mg /kg体重饮水，连饮7d。同时，饲料中添加0.5%的维利素，并用维生素C按5..mg/L饮水。

采取以上综合防治措施后，病鸡数量减少，病情逐渐好转。4天后，死亡停止，食欲增加，精神良好，恢复正常。

6．小结和讨论

6.1 此次发病的原因可能与种鸡场没有及时淘汰O78 血清型大肠杆菌阳性种鸡而造成垂直感染有关；孵化设备、种蛋的消毒不彻底，育雏期间没有及时选择高敏药物进行连续预防，也是发病的一个原因。

6.2 本病在临床症状上容易与巴氏杆菌病、沙门氏杆菌病混淆，须进行实验室检验方可确诊。应用药物防治大肠杆菌，应作药敏试验，根据结果，用高敏药物治疗，才能取得好的疗效。