鸡新城疫I系弱毒疫苗的制造方法

徐　炜

（辽宁省重大动物疫病应急中心　110000）

鸡新城疫是由病毒引起的一种急性败血性传染病，俗称“鸡瘟”，即所谓亚洲鸡瘟。本病一年四季均可发生，尤以寒冷和气候多变季节多发。各种日龄的鸡均能感染，20～60日龄鸡最易感，死亡率也高。由于其易感性强、死亡率高，所以对于该病是以免疫预防为主。疫苗分灭活苗和活苗，活苗主要有I系，Ⅱ系（B1株）、Ⅲ系(F系)、Ⅳ系（Lasota株）、克隆一30等。I系为中等毒力疫苗对雏鸡毒力较强可出现症状甚至引起死亡，但能较快产生坚强免疫力，多用于2月龄以上的鸡或紧急预防接种。

1　毒种

鸡新城疫工系苗毒种，由中国农业部兽医药品监察所供给。作为I系苗毒种的条件是：对鸡胚的最小致死量不低于10　-6／mL，鸡胚于接种后24～72h内死亡，胚体病变明显，对红血球凝集在1:　80以上；毒种对鸡的最小免疫量应不低于10　-　/mL；安全、无菌。

2.　工系苗（湿苗）的制造方法

将健康的种鸡所产新鲜卵（一般不应超过7天），除去卵壳外污物后，放入38.5～39.O℃，相对湿度在60%～70%孵卵箱内孵化9～10日，作为制苗鸡胚的来源，鸡胚接种前，应照蛋挑选生活力强的发育胚，并划好气室部位和接种部位，凡生活力弱与死胚均不要。

毒种移种时用无菌生理盐水将毒种作1:100稀释，接种9～10日龄鸡胚的尿囊腔内，每胚0.　ImL，接种以后融化石腊将卵壳上的接种孔封闭，继续置孵卵箱内孵化。此后，每日上下午各照蛋1次。胚胎应于接种后24～48h内死亡（一般36h前后死亡），将死胚卵气室向上，置0～10℃冷却4～24h，凡在24h内和48h以后死亡的胚卵均弃去不用。

将冷却后的死胚卵取出，气室部向上并涂擦5%碘酊。用灭菌镊子敲破气室部位的卵壳并剔除之，揭去卯壳膜，剪破绒膜和羊膜，以无菌吸管吸取尿囊液和羊水，装入灭菌瓶内，若干胚的胚液混合为一组，并立即加入青霉素、链霉素各500U／mL。放入冰箱保存，经检验后即成疫苗。在收获疫苗时，应观察胚体病变情况是否良好（胚体全身充血，头、胸、背、翅和趾部有小出血点）。注意胚液是否清朗，若胚体无病变，胎儿腐败，胚液混浊者应废弃，亦可同时收获胚体，和胚液一起磨碎，制成全胚疫苗。

收获的鸡胚液应逐瓶进行无菌检验，即每瓶抽疫苗0.　2mL，分别接种于鲜血斜面和熟肉基内。在37℃培养72h，应无细菌生长，然后将无菌生长之疫苗混合后，分装小瓶或安瓿内。每瓶0.5～1.　OmL。瓶上或安瓿上要注明疫苗名称、批号及收获日期。

3疫苗检验

每批疫苗制好后，在使用前须做以下3项检验，均合格者方可使用。

无菌检验：每批疫苗任抽5瓶作为样品，方法同上，应无细菌生长，做细菌培养同时，亦可注射小白鼠若干只，每只皮下注射0.　2mL，观察10天，应全部不死。若有细菌生长或小白鼠死亡，此苗废弃。

安全试验：用4～12个月龄未经鸡新城疫疫苗免疫过的健康鸡3只，每只鸡肌注100倍稀释疫苗ImL，观察10～14天，应无任何反应，或有轻度反应。且在14日内恢复者，认为合格，有重反应不能复原时，应予重复检验1次。

效力试验：①选取4～12月龄的健康鸡若干只，分为二组，一组为对照组，所有鸡必须没有感染过鸡新城疫或没有接种过本疫苗。如情况不明，应于试验前，每只鸡翅静脉抽血分离血清作血凝抑制试验，血凝抑制价在1：20以下者才能供试验用，但是超过1：20不能用来试验。②试验组每只鸡以1000倍稀释的疫苗肌注1mL。观察10～14天后，与对照组一起以鸡新城疫强毒攻击。攻击量每只鸡肌注1000倍稀释的新鲜鸡胚强毒液1mL。观察10～14天，试验组免疫鸡应全部健活，而对照全部发病，并且至少死亡2/3方能合格，如果对照鸡不能全部发病或全部发病而死亡少于2/3时，可重复试验1次，如免疫鸡发病或死亡，这批疫苗视为无效，予以废弃。

4疫苗使用与保存

使用方法：①本苗专供2个月以上鸡使用，初生雏鸡禁用。②用灭菌生理盐水或蒸馏水或冷开水（不可用热水或温水）将本苗稀释100倍，以消毒的钢笔尖蘸取稀释苗，刺入鸡翅膀内侧无血管处皮下（蘸、刺各2次）。或皮下注射0.　1mL，也可稀释1000倍，肌注1mL。③稀释后疫苗须冷藏，并于当日用完，次日无效。④疫苗注射后3～4天，即可产生免疫力。免疫期成年鸡为1年，2月龄鸡为半年。

保存：鸡胚液收获日期起，-15℃不超过20天，15～25℃不超过14天；25～30℃不超过7天。