水貂克雷伯氏菌病的诊断

王文旭 （辽宁省盖州市动物疫病预防控制中心 115200）

水貂克雷伯氏菌病于1947年Morris在美国首次报道。以后该病在世界各地蔓延。我国于1987年在东南沿海一些省份也发现了此病。发病率为3.95%，死亡率为56.16%。水貂不分年龄大小均易感。主要通过肉类工厂下脚料、水貂的粪便及饮水而传播。本病的病原为肠杆菌科、肺炎克雷伯民菌属中的肺炎克雷伯氏菌。临床的主要特征为脓肿和脓毒败血症变化，体温高达41℃。颈部出现肿胀，大的如肥猪的颈圈。背部和后肢也出现脓肿。

1 流行病学

肺炎克雷伯氏菌对水貂、家兔、野鼠及人均有病原性。水貂不分年龄大小，均易感。用自然分离的克雷伯氏菌感染雪貂也可以发病。用我国的分离株的纯培养液，通过肌肉、皮下或腹腔接种标准黑色水貂，不仅能引起发病，而且能引起死亡。该病主要通过饲料，以及病貂通过粪便和饮水而传播。所以在自然条件下，可通过消化道、呼吸道及创伤而感染。

2 临床症状和病理学诊断

急性型发病突然，体温升高41.0~41.5℃，精神沉郁，食欲废绝，呼吸困难，很快死亡。剖检时可见化脓性或纤维素性肺炎，心内外膜炎。肝、脾肿大，肾有出血点或出血性梗死。蜂窝织炎型病貂喉部出现蜂窝织炎向颈蔓延，直达肩部，形成脓肿。肝肿大，质脆弱，充血，淤血，切面有多量凝固不全，流出暗褐红色血液，被膜紧张，边缘钝，切面外翻。肾上腺肿大，切固有小脓肿。脓疱节型病水貂周身皮肤出现小脓疱，破溃后流出白色或淡蓝色脓汁，形成瘘管，局部淋巴结肿大。切开脓疱流出白色或淡蓝色的脓汁，内脏为败血症变化，充血和淤血。麻痹型病貂食欲缺乏或不食，后肢麻痹，运动障碍，2~3天内死亡。膀胱充满黄红色尿液，黏膜肿胀增厚。肾、脾肿大。

3 病原学诊断

病原分离无菌采取病水貂的肝、脾、肾、心血等。取脓汁、肝、肾、脾及淋巴结等病料，涂片、革兰氏染色阴性，见有大小为1~2微米×0.5~0.8微米的短杆菌。无鞭毛，无运动性，有很厚的荚膜，无芽胞。细菌培养。取病料接种鲜血平板、普通平板或鉴别培养基平板上，37℃ 24小时，生长良好。菌落大小为2~4毫米，圆形、光滑、整齐，呈淡灰白色，发酵乳糖，不溶血，粘稠，钩取时呈丝状，故菌落大而粘。革兰氏染色为阴性短杆菌，有荚膜，不运动。如用病料接种麦康凯-肌醇-亚硝酸钾（或羧苄青霉素）选择性培养基上，本菌能形成红色菌落，用其涂片镜检，可见到本菌。动物接种试验。取18~24小时肉汤培养物，给5只小鼠分别腹腔接种1毫升，在24小时内死亡。剖检，取腹腔液涂片，镜检，可见到革兰氏阴性短杆菌。荚膜肿胀试验。取腹腔液一环，加未稀释的阳性血清1环，再加印度墨汁或吕氏美兰（吕氏亚甲兰）1环，将3环液体混均，加盖玻片，用油镜检查。同时以阴性血清或生理盐水代替阳性血清作对照。加有阳性血清的荚膜较大，为阳性。

细菌鉴定。镜检。取病料涂片，革兰氏染色，（www.nczfj.com）镜检。在显微镜下可见大小为1~2微米×0.5~0.8微米的短杆菌，无鞭毛，无芽孢，有荚膜。生化试验。多数菌能发酵葡萄糖，产酸产气。在乳糖、蔗糖、杨苷、肌醇和侧金花产酸，并产气。甲基红试验和乙酰甲基甲醇试验呈阴性。不产生硫化氢，不液化明胶，不产生靛基质。分解尿素，能还原硝酸盐。多数菌利用枸橼酸为唯一碳源，氨为唯一氮源。

4 血清学诊断

葡萄球菌A蛋白（SPA）的协同凝集试验检验前，选用葡萄球菌标准菌株和不含A蛋白菌株各1株，分别培养于葡萄糖琼脂上18~24小时，用磷酸盐缓冲液（PBS）洗下菌落，离心洗涤2次，将沉淀按10%浓度悬于含0.5%甲醛的PBS中，室温搅拌3小时，再于50℃水浴30分钟，洗涤3次，用含0.1%叠氮钠的PBS配成10%浓度的SPA菌悬液。取上述菌悬液1毫升加克雷伯氏菌抗血清0.1毫升，置37℃ 30分钟，取出用含0.1%叠氮钠的PBS洗涤离心2次，去上清液并将沉淀配成10%SPA致敏菌液。不含A蛋白的菌株制备的菌悬液按同法致敏作为试验的阴性对照。检验时，通常用平板法，取1滴被检菌液和1滴致敏的SPA菌液滴于平板上，混合2~5分钟内观察。在不含A蛋白的菌株致敏的菌液对照不凝集，而被检菌液凝集则判为阳性。检验也可用试管法，先将被检菌液倍比稀释不同稀释度，然后分别加入适当浓度的致敏SPA菌悬液，混合后放于37℃水浴2~3小时观察结果。结果判定同常规凝集试验。