马病毒性动脉炎的流行与诊断

李淑兰 （哈药集团生物疫苗有限公司 哈尔滨 150069）

1 流行病学

本病的病原为动脉炎病毒属中的马动脉炎病毒。本病仅马属动物有易感性，发病呈散发，一般不致死亡。但妊娠母马或幼驹人工接种病毒后可引起约50%死亡，妊娠母马有50%~60%流产。康复马血清内有中和抗体和补体结合抗体，并有免疫性，对再传染或人工接种有抵抗力，一般可维持1年以上。病马的眼分泌液、鼻液、唾液、精液、血液、流产胎儿的胎液和各种组织内均含有病毒，病毒由粪便、尿、鼻液、眼泪排出，通过饲料、饮水、环境传染于易感马，或通过气雾，被易感马吸入后引起传染，配种也能传染。

2 临床症状

本病潜伏期为2~10天，多呈急性经过，病马最初表现为发热及流出浆液性鼻液，随后眼睑水肿，大量流泪，鼻黏膜充血，结膜炎以及白细胞减少。病马常出现出全身衰竭，呼吸困难、厌食、萎顿、腹痛、腹泻、减重和脱水，还可能出现角膜炎、羞明、黄疸和四肢、腹下、乳房及阴囊部的浮肿。妊娠母马常流产，流产率可达90%以上，流产发生在感染后的10~33天。流产通常出现在临床发病期或恢复早期，胎儿常在发生流产之前就已死亡。人工感染可导致死亡，幼驹表现比较严重，自然发病者死亡率较低。

3 剖检变化

病马主要表现为出血和水肿。病马眼结膜、眼睑、瞬膜、鼻腔黏膜、咽喉部、喉囊、邻近荐臀部的肢体与会阴区皮下组织充血、水肿与点状出血。水肿和出血还见于网膜、肠系膜、腹壁脂肪、肺胸膜与小叶间质、腹腔内淋巴结阔韧带、肾上腺皮质以及脑。回盲结肠动脉和前肠系膜动脉的经络以及子宫阔韧带，胸膜下、肺小叶中膈等处也有类似的病变存在。肠管，尤其是盲肠和结肠的病变呈分段性，每段长约1~2米，界线明显。肠壁水肿增厚，经常出现出血性和浮膜性肠炎，胃和小肠也有出血、水肿的变化。幼驹常发生脾出血性梗死和肾上腺内的小血肿。公马常有睾丸硬化的病变。病马的浆膜腔内常有大量富含蛋白质和纤维素的液体，胸腹腔积水量可达10升之多。结缔组织内也充满水肿液。流产胎儿水肿，呼吸道黏膜和脾被膜上有出血点。不论是流产胎儿或已在子宫内死亡的胎儿都没有特征性动脉炎病变。

4 病原学诊断

采取急性病例的全血或沉淀白细胞层，也可采取流产胎儿的脾脏，不能及时处置的病料可置于含有抗生素和1%牛白蛋白的Hank′s氏缓冲盐溶液中，在零下20℃可保存数星期。尸体剖检时可取肺、脾和淋巴结制成组织悬液，还可采集种公马的精液作为病毒的分离材料。初代分离培养最好用马肾、睾丸和皮肤细胞。如有病毒，一般在接种后3~5天出现细胞病变。另外，此病毒在覆盖培养物中能产生空斑。

从精液中分离马动脉炎病毒适用于检测马精液的带毒情况。（www.nczfj.com）将精液放入15毫升离心管中，充分震荡，必要时可放入灭菌玻璃球。于4~10℃下，1 500转/分钟离心10分钟，保留上清液。再将精液上清液做1∶10、1∶30、1∶100稀释。准备25平方厘米细胞培养瓶，一种为培养24~48小时的PK-15细胞，另一种为马卵巢细胞，并分别将培养瓶标记，同时留未接种的细胞作为对照。弃掉培养瓶中的培养液，分别加1毫升1:10精液稀释液于PK-15和马卵巢细胞培养瓶中，再分别加1毫升1∶30、1∶100的稀释精液于PK-15和马卵巢细胞培养瓶中。加盖后放37℃培养箱培养1小时，倒掉精液，加7毫升培养液于每个培养瓶中，将培养瓶放37℃培养箱培养。

结果检查，接种细胞和对照组培养7天，用胰酶将所有细胞消化下来做病毒荧光抗体检查。倒掉培养液，用磷酸盐缓冲液冲洗细胞。每瓶加0.6毫升胰酶，等细胞从瓶壁脱落后，再加6毫升培养液。吸取0.5~1.0毫升细胞液，滴2滴于玻片上，在37℃二氧化碳培养箱培养4小时，将玻片用丙酮固定，并用EAV荧光抗体诊断液染色。将剩余的细胞连同培养瓶在零下70℃冷冻。准备培养24~48小时的PK-15细胞和马卵巢细胞。倒掉前一个细胞瓶中的培养液，将冷冻的细胞瓶解冻。每瓶加1毫升解冻液于相应的培养瓶中，每天检查细胞病变，再加6毫升相应营养液，37℃培养，每天检查细胞病变，5~7天后用胰酶消化后作荧光抗体检查。经过2次荧光抗体检查均为阴性的，则无马动脉炎病毒。

病毒鉴定主要应用中和试验、补体结合试验和蚀斑减数试验等，其中以蚀斑减数试验为最敏感。