公羊冷冻精液技术的研究详情

随着国内羊产业养殖逐渐生产化需求,人工授精技术对提高动物、畜产品质和扩大数量起到积极重要作用,精液冷冻人工授精技术迫切需要应用于生产推广中。公羊冷冻精液的品质显得至关重要,与其相关的很多因素都能对其质量造成影响,其质量好坏对受胎率起决定性作用,所以要进一步深入研究公羊的精液冷冻技术。为此,本文简要介绍公羊精液稀释液中的营养成分、稀释方法、冷冻温度等因素对精液品质影响的研究概况,以对公羊精液冷冻保存技术提供理论参考。下面具体来看看：公羊冷冻精液技术的研究详情。

1、稀释液主要成分的影响

1.1糖类

糖在稀释液中具有多种作用可以增加稀释液的渗透压并且作为低温保护剂起作用，它的主要作用在于能够在亲水组织中替代水分子，而这一特性就可以对细胞在经历快速的温度变化过程中起到保护细胞膜的作用。另外，糖还可以通过增加稀释液的黏性来改变稀释液的有效性。这样能够防止冰晶的形成而且易于形成玻璃体化。

1.2　卵黄

卵黄在稀释液中具备重要作用，具有防止精子冷休克，维持精子活力、保护精子顶体和线粒体膜等功能。Jone等研究证实一般精液稀释液中卵黄的含量范围为15%～20%为宜。

1.3　冷冻保护剂

迄今已证实了几种低温保护剂对精子的作用，例如DMS()、乙二醇和甘油等，但是甘油具备对精子最好的保护效果。Bernstein等首次研究发现9.2%浓度的甘油在21℃情况下具备冷冻保存哺乳动物和家禽精液的能力。Ploge等2。深入研究了甘油的抗冷冻效果。Emmens等在　79℃情况下成功的进行了绵羊精液冷冻保存。从日前研究现状来看，由于甘油渗透和毒性作用，其浓度不易过高，添加应用最多剂量甘油浓度为6%。

1.4缓冲物质

精液中的精子一直处于运动和代谢中，造成稀释液中的pH值不断升高，一般稀释液的pH值在6.8～7.2之间。为更有利于精子生存，凶此向稀释液中添加缓冲物质。Tris、EDTA和柠檬酸盐等是冻精稀释液应用较多的缓冲物质，主要作用是缓冲精子在保存过程中由于代谢而使精液的pH值的升高带来不利影响，起到降低pH值的作用。柠檬酸盐是应用最早的缓冲物质。王俊峰研究认为Tris（三羟甲基氨基甲烷）作为冷冻稀释液在牛的精液冷冻中起到很好的缓冲作用。Salamon研究发现Tris在绵羊的稀释液中也具有更好的缓冲性和渗透性，并且毒性作用较低。有研究表明，Tris葡萄糖卵黄稀释液冷冻的绵羊精子解冻后的复苏率更高。在Tris稀释液中添加浓度为7.3%的大豆磷脂，解冻后精子顶体的完整性最好。

2、冷冻和解冻操作过程对冻精液品质的影响

2..1　精液稀释和冷冻平衡

实验之前根据不同的冷冻方法采取不同的稀释比例，颗粒精液一般采用1:1的比例，而细管精液冷冻一般为1:3。当稀释倍数增加，产羔率就会下降。两次稀释法能够大大降低甘油等冷冻保护剂对精子的毒害作用。稀释以后冉进行降温与平衡。Polge最先在牛的精液冷冻保存中应用了平衡技术。平衡后一般有更好的冷冻结果，温度控制在4～5℃之间。丁瑜等¨研究结果表明，水浴平衡由37℃降温到5℃时，降温速率为每分钟0.　21℃，降温平衡到5℃的方法对绵羊冷冻　解冻精子有较好的保护效果。

2..2　冷冻和解冻

日前普遍公认的精液冷冻保存的原理是在冷冻精液过程中避开冰晶形成的温度区，使精子内外的水分急速降温在60～-250℃的超低温玻璃化温度区下形成玻璃化冻结，加以长期保存。其中初冻温度对解冻后精子的活率起到关键作用。赖彦等通过液氮熏蒸将初冻温度控制在　80℃可以使绵羊情期受胎率提高0.9～1.7个百分点。研究学者认为精液的冷冻要选择合适的速率，不能过快，也不能过慢，过快的冷冻速率造成精子细胞内的大量水分不能够渗出，冰晶化形成，造成精子死亡现象的发生；冷冻速率过慢，导致稀释液渗透压和pH的变换，从而影响精子活率。

解冻过程是精液冷冻的逆过程，同样要避免精子冰晶化的形成。不同的解冻条件对羊冷冻精液品质有着很大的影响。梁术奎等研究结果肉用种公羊细管冷冻的精液在／I5～60℃的水浴条件下，精子复苏率达到74%。周占琴等研究维生素B12用于山羊冻精颗粒解冻，效果十分理想。与干解冻和2.9%柠檬酸钠相比，维生素B12解冻的精液不仅活力旺盛，而且在室温和低温条件下的保存时间延长了2．41～6.35倍。