奶牛贝诺孢子虫病的病因分析 奶牛贝诺孢子虫病的预防措施

贝诺孢子虫病是一种对牛、马、羚羊、鹿和骆驼伤害极大的一种慢性寄生性的原虫病，患病动物会有皮肤脱毛和增厚的特性，此病分部较广。下面大家一起来了解一下：奶牛贝诺孢子虫病的病因分析 奶牛贝诺孢子虫病的预防措施。

1、发病情况

黑龙江省大庆市某奶牛场饲养的277头奶牛中有7头成年奶牛发病，出现明显的临床症状。牛群常规免疫正常，发育状况良好，1星期前2只奶牛出现精神沉郁、厌食、背部脱毛、皮肤增厚等症状，但未引起饲养员重视，病情逐步发展，牛群中已有7头成年奶牛出现临床症状。就诊前该牛群饲喂过伊维菌素结合氟苯尼考进行治疗，但病情未见好转。

2、临床诊断

对患牛进行视诊和触诊，如皮肤、巩膜、关节。这些发病牛有一些共同的临床症状，包括膝关节肿大，浅表淋巴结肿胀，在巩膜及结膜处有针尖大小的丘疹，皮肤增厚硬化，特别是在乳房、肘、肩和脖子处尤为明显。此外，水肿和红斑在这些处也较为明显，但是患牛并未感到任何的瘙痒。由以上临床症状，笔者初步推测这些发病奶牛患了贝诺孢子虫病。

3、实验室诊断

显微镜观察。选择患牛背部症状明显处，用打毛剪将背部皮肤处多余的毛清理干净，用70%酒精将欲取样部位擦拭消毒后，用眼科镊采集患病皮肤表面的乳突状小结节，装于无菌的采样瓶中，带回实验室。将结节剪碎，在显微镜下仔细观察，发现大量疑似贝诺孢子虫的包囊。

分子生物学诊断。利用DNA提取试剂盒提取患牛血液中的基因组总DNA。利用本课题组先前发表的贝诺孢子虫PCR诊断方法来扩增目的片段‘1]。上游引物BesITSIF(　5´-TGA　CAT　TTA　ATA　ACA　ATC　AAC　CCT　T　3　7)和下游引物BesITSIR(5　7　GGT　TTG　TAT　TAA　CCA　ATC　CGTGA　3　7)，PCR反应为25uL体系，反应条件为：95℃5　min;95℃1　min、50℃45　s、72℃1　min，共35个循环，最后72℃延伸7　min。PCR扩增产物于o．8%琼脂糖凝胶电泳仪中进行检测。结果显示7头患牛均成功扩增出贝诺孢子虫的目的条带。基于临床症状观察、病原检测和分子生物学方法，确诊这些奶牛为贝诺孢子虫病。

4、病因分析

贝诺孢子虫的终末宿主为猫，而牛是其中间宿主。当终末宿主食入含有贝诺孢子虫包囊的肉品后，其在终末宿主体内以裂殖生殖进行增殖，最终形成卵囊随分别排出体外，卵囊在外界环境中孢子化称为感染性阶段的卵囊，被中间宿主牛食后感染。据报道，牛群之间也可以传播贝诺孢子虫病，主要通过吸血的昆虫，如牛虻，将病牛血液中的贝诺孢子虫滋养体在牛群中传播[3]。本次牛贝诺孢子虫病发生于七八月份，其流行时间与吸血昆虫的活跃时间有密切关系。另外，还有报道指出，牛的眼泪中也存在贝诺孢子虫的速殖子，而且该病可以通过一些吸食眼泪的昆虫传播[4]。笔者分析该场奶牛患病就要原因是吸血昆虫牛虻的传播，在奶牛场见到了大量牛虻，同时也发现许多蝇类在吸牛的眼泪，也存在蝇类传播的可能性。

5、预防措施

鉴于贝诺孢子虫病的治疗尚无特效药物，因此对于该病的预防尤为重要。对于该病的预防，奶牛场应该做到以下几点。首先，建立贝诺孢子虫病快速准确的诊断方法，这是防控奶牛贝诺孢子虫病的根本。其次，需要建立健全奶牛贝诺孢子虫的评价系统，一旦有疑似病例的出现，立刻进行隔离或捕杀处理，彻底根除该病的传染源。第三，由于昆虫在贝诺孢子虫病在牛群中传播的重要性，因此对于该病的流行区，建议在昆虫活跃期使用杀虫剂来消灭传播源。

奶牛贝诺孢子虫病的病原体
贝诺孢子虫属孢子虫纲、真球虫目、肉孢子虫科、贝诺属(Besnoitia)，在牛寄生的为贝氏贝诺孢子虫(B.besnoiti)。孢子虫的包囊寄生于病畜的皮肤、皮下、结缔组织、筋膜、浆膜、呼吸道粘膜和巩膜等许多部位。包囊色灰白，形圆，呈细砂粒样，肉眼刚能辨认，一般散在、成团，或呈串珠状排列。包囊直径约为100μm-500μm，囊壁由宿主组织所形成，分两层：外层厚，均质，呈嗜伊红性；内层较薄，内合许多扁平的巨核，囊内无中隔。包囊内含有大量缓殖子(囊殖子)，其大小平均为8.4μm×1.9μm，呈香蕉形、新月形或梨形，一端尖，一端圆、核靠近中央。在急性病牛的血涂片中有时可见速殖子(内殖子)，其形态、构造与缓殖子相似，大小平均为5.9μm×2.3μm。
流行病学
贝氏贝诺孢子虫的(beishibeinuobaozichongde)终末宿主为猫，天然中间宿主为牛和羚羊、兔、小鼠等。但其特征病变主要发生于天然中间宿主。发病有一定季节性，吸血昆虫可能是传播者和宿主。主要传播途径是消化道。
致病作用
牛吞食了由猫排至外界环境中并已发育成具有感染性的卵囊后，其中的子孢子便被释出，经胃肠道粘膜进入血液循环，在真皮、皮下组织、筋膜和上呼吸道粘膜等部位的血管内皮细胞里进行内双芽增殖，产生大量速殖子。速殖子随细胞破坏而被释出，再侵入其他细胞继续产生速殖子。这一过程的不断进行，逐渐刺激机体产生相应的抗体，使机体抵抗力增强，从而发生机体反应，将速殖子包裹而形成包囊，此时速殖子便从组织中消失。但包囊中的速殖子变成了发育较缓慢的缓殖子。当猫采食了牛体内的包囊后，其中的缓殖子在小肠粘膜上皮细胞和固有层中变为裂殖体，进行裂殖生殖和配子生殖，形成卵囊随粪便排出。卵囊在外界进行孢子化形成，含有两个孢子囊，每个孢子囊又有四个子孢子。这种卵囊即变为感染性卵囊。
症状
首先出现体温升高，1-4周皮肤可见包囊。牛群发病率1%-20%，病死率约10%。临床上可分为三期。
：病初体温升高至40℃以上，持续2-5d。病畜畏光，喜阴暗。被毛无光，腹下、四肢有时全身发生水肿。步伐僵硬。呼吸、脉搏增数。反刍减少或停止，偶见下痢。孕牛可发生 流产。颈浅和髂下淋巴结肿大。流泪，角膜浑浊，巩膜充血，其上可见针尖大灰白色虫体包囊。鼻粘膜潮红，也有许多包囊。流浆液性、化脓性或血脓性鼻液。如咽喉受害则有咳嗽。此期约经5-10d。
：被毛脱落，皮肤增厚、龟裂，流出混血的浆液。病畜长期卧地，发生褥疮。前期水肿消退，肘、颈、肩部发生硬痂。此期约半月至1月，病畜如不死亡则转为下一期。
干性皮脂溢出期：在发生过水肿的皮肤，其被毛大都脱落，皮肤上形成一层厚痂，似患螨病的皮肤或象皮。淋巴结仍肿大。病畜沉郁、无力。公牛睾丸初期肿大，前期萎缩。
病理变化
除症状中所述病理变化外，尸体剖检时，见病部皮下因组织增生而肥厚。常在头部、四肢、背部、腰部、臀部、股部等皮下组织、筋膜及肌间结缔组织中，见大量灰白色圆形贝诺孢子虫包囊。轻症时包囊仅见于四肢尤其下部的皮肤，重症时全身皮下及后肢的跟腰、韧带、趾深与趾浅屈腰、腓肠肌腱、外侧伸肌腱及与腱膜相连的肌组织都有包囊形成。此外，包囊巡可寄生于舌、软腭、咽喉、气管、肺实质、胃肠道粘膜及大网膜等处。
：皮肤与皮下组织：包囊主要寄生于真皮乳头层和皮下结缔组织中，偶见于表皮。病初表皮过度角化，并因细胞明显增生而肥厚。真皮下的结缔组织因孢子虫寄生而明显增生，其间有较多淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润，皮脂腺、汗腺和毛囊萎缩甚至消失。
肌肉：包囊多散在于骨骼肌纤维间，偶寄生于纤维内。如包囊变性坏死，其中的囊殖子死亡崩解，其周围会发生明显的嗜酸性粒细胞和淋巴细胞反应。
贝诺孢子虫包囊还可寄生于下列器官的组织中：肺泡间隔、淋巴结被膜和小梁、皮下血管的中膜和内膜、舌尖横纹肌或舌下结缔组织、喉会厌部粘膜下结缔组织、气管粘膜固有层、睾丸与附睾间质及胃肠道粘膜等。
诊断
(1)用病部皮肤深层刮取物检查贝诺孢子虫包裹及囊殖子；
(2)用病牛血液接种(yongbingniuxueyejiezhong)家兔，在发热期做血液涂片5，镜红虫体；
(3)死后剖检时在皮肤、皮下等部位检查0.5mm大的白色包囊结节。