犬冠状病毒病的诊断与治疗

张 磊 刘兆宇 （黑龙江省二九一农场畜牧兽医科 黑龙江集贤 155923）

本病的病原为冠状病毒科冠状病毒属中的成员。本病毒对犬、貉、狐狸等犬科动物均感染，不同品种、性别、年龄的犬都可感染，但幼犬最易感，发病率和死亡率都很高。此病不分季节，一年四季均能发生，但以冬季多发。气候突变，卫生条件差，犬群密度过大，断奶转舍，长途运输等均可诱发本病。病犬和带毒犬是主要传染源。传染的途径是经呼吸道、消化道向外界排出病毒，污染饲料、饮水、用具、犬舍、运动场等，从而传染给健康犬和其他易感动物。

1 临床症状

人工感染的犬潜伏期为1~2天，自然感染的犬潜伏期为1~5天。该病传播迅速，一旦出现病犬，可迅速蔓延全群。病犬主要表现为呕吐和腹泻。严重者精神不振，呈睡眠状态，食欲减少或废绝，多数无体温变化，白细胞数正常，口渴，鼻镜干燥，呕吐持续数天后，出现腹泻，粪便为粥样或水样，呈橘红色或暗褐色，恶臭，混有粘液或少量血液。病犬迅速脱水，体重减轻，多数病犬在7~10天恢复，有些病犬特别是幼犬在发病后1~2天内死亡，成年犬的症状多轻微。发病初期白细胞减少，水和电解质代谢紊乱。

2 病理学诊断

病犬主要表现为胃肠炎变化，肠壁变薄，肠管内充满白色、黄绿色或紫红色血样液体，肠黏膜充血、出血和脱落，胃黏膜出血和脱落，胃内有粘液，胆囊肿大。犬小肠绒毛变短、融合，隐窝变深，绒毛长度与隐窝深度之比发生明显变化，上皮细胞变性，胞浆内且现空泡，黏膜固有层水肿，炎性细胞浸润，上皮细胞变平，杯状细胞的内容物排空。

3 病原学诊断

病料的采集及处理，由于病犬自粪便中含有许多的病毒粒子，所以应采集病犬的粪便，分离病毒。

病毒的分离，采用细胞培养方式进行。取病犬的粪便，经常规处理后，接种犬的原代细胞和传代细胞，如犬的原代肾细胞和胸腺细胞、胚胎、滑膜及A-72细胞等均易感。用本病毒感染后第二天即可产生与冠状病毒相似的细胞病变，然后取细胞培养物与已知的标准阳性血清进行中和试验，鉴定本病毒。

电子显微镜检查，取粪便用氯仿处理后低速离心，取上清液滴于铜网上，经磷钨酸负染后，用电子显微镜观察病毒。可见本病毒多为球形或椭圆形，长75~120纳米，宽75~80纳米，有囊膜，其表面有20纳米的纤突，纤突末端呈球状，使整个纤突呈花瓣状。

4 血清学诊断

酶联免疫吸附试验（ELISA），利用犬冠状病毒高免血清提取IgG，以pH值为9.6的碳酸盐缓冲液稀释至1毫克/毫升，滴加于聚苯乙烯微量滴定板孔内，每孔100微升，于4℃包被过夜，并用5%兔血清的PBS（pH值为7.4，含0.05%吐温-20）37℃封闭1小时。然后用PBS洗涤液泡洗3次，每次3分钟，甩干后加入1∶10烯释的待检病毒，每孔100微升，37℃感作2小时。再用上述洗涤液泡洗3次，随后加入1∶400稀释的抗冠状病毒的酶标抗体100微升，37℃感作2小时，如上泡洗3次以上。最后加邻苯二胺-过氧化氢酶底物溶液100微升，室温感作30分钟，再加50微升2摩尔/升硫酸终止反应。

结果判定，用肉眼观察反应物的颜色变化，来判断阴性或阳性。

免疫荧光试验。将自病犬采取的肾、脾等病料，制成小块（www.nczfj.com），用冷冻切片机切片，然后将切好的组织片贴于洁净的载玻片上，用风扇吹干，再用丙酮固定。再将固定的标本用PBS洗涤液洗3次，每次3分钟，最后放蒸馏水中5~10分钟脱盐。将标本放于室温干燥或用吸水纸吸干。然后在标本上滴加适量的荧光抗体，置湿盒中，放于37℃条件下感作30分钟。再用PBS液将荧光抗体溶液轻轻冲洗掉，将其通过3杯PBS溶液，用吸纸吸干。最后用磷酸甘油滴于标本上，盖上盖玻片，封片，放于荧光显微镜上进行观察。直接法应设阴性、阳性标本对照。

结果判定，在阳性标本对照出现鲜亮的黄绿色荧光，阴性标本无荧光时，如初检样本见有鲜亮黄绿色特异性荧光可判为阳性，不出现荧光者判为阴性。

5 治疗

方法1：氟苯尼考注射液，每次肌肉注射20毫克/千克体重，每隔48小时1次，连用2次。方法2：葡萄糖甘氨酸溶液，配制方法为葡萄糖45克，氯化钠9克，柠檬酸0.5克，甘氨酸7克，柠檬酸钾0.2克，无水磷酸钾43克，溶解于2 升温开水中，溶解混匀，让犬自由饮用，切勿灌服，可缓解症状。